文档介绍：Western blot
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印迹法（blotting）是指将样品转移到固相载体上，而后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法。
1975年，Southern建立了将DNA转移到***纤维素膜（NC膜）上，并利用DNA－DNA杂交检测特定的DN***段的方法，称为Southern印迹法。
而后人们用类似的方法，对RNA和蛋白质进行印迹分析，对RNA的印迹分析称为Northern印迹法，对单向电泳后的蛋白质分子的印迹分析称为Western印迹法，对双向电泳后蛋白质分子的印迹分析称为Eastern印迹法。
埃德温·迈勒·萨瑟恩 （Edwin Mellor Southern）
是什么？
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DNA重组技术
siRNA的转染技术
表观遗传学（***化，miRNA）
凡是涉及蛋白水平检测的研究，均可运用到western blot技术
能做什么？
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为什么要作蛋白质印迹实验？
研究一些体外的蛋白质分子，寻找目的蛋白是否存在样品当中
蛋白质的表达情况，上调或下调表达，在不同的样品中，如疾病和正常的样品之间的表达差异性。
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Western Blot基本原理
在电场的作用下将电泳分离的多肽从凝胶转移至一种固相支持体，然后用这种多肽的特异抗体来检测。
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Western Blot 基本原理
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流程
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一、 原理
与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰***凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如***纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。既可以定性，又可以半定量的Western是初步鉴定蛋白质最方便也是最通用的方法。
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E
-PAGE电泳
原理：
SDS 是一种离子性的界面活性剂, SDS 与蛋白质混合时,它会以其碳链与蛋白质之疏水性***基酸结合将蛋白质包起来, SDS 的平均结合量是 1: (以重量为单位),而蛋白质结合固定比例之 SDS 後,由於 SDS 带强负价,使蛋白质原先的带电价微不足道,且每单位重量之蛋白质带电价一致 (charge density),所以决定不同蛋白的泳动速率就只剩下分子大小一项因素
Western Blot 的具体步骤
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-
滤纸
凝胶
膜
滤纸
+
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