文档介绍：热线电话: 021 - 6485 8053 8009881995 E - mail:******@.cn 网址: www. s h i .cn 1 如何防止 RNA 酶污染 在所有RNA实验中, 最关键的因素是分离得到全长的RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶(R N A 酶) 的污染。由于R N A 酶广泛存在而稳定,一般反应不需要辅助因子。因而 R N A制剂中只要存在少量的R N A 酶就会引起R N A 在制备与分析过程中的降解,而所制备的R N A 的纯度和完整性又可直接影响RNA分析的结果,所以RNA的制备与分析操作难度极大。 在实验中, 一方面要严格控制外源性RNA酶的污染; 另一方面要最大限度地抑制内源性的RN A 酶。RNA酶可耐受多种处理而不被灭活,如煮沸、高压灭菌等。 外源性的 R N A酶存在于操作人员的手汗、唾液等, 也可存在于灰尘中。在其它分子生物学实验中使用的RNA酶也会造成污染。这些外源性的RNA酶可污染器械、玻璃制品、塑料制品、电泳槽、研究人员的手及各种试剂。而各种组织和细胞中则含有大量内源性的RNA酶。 一、防止RNA酶污染的措施 1. 所有的玻璃器皿均应在使用前于 180℃的高温下干烤 6hr或更长时间。 2. 塑料器皿可用 0. 1% DEPC水浸泡或用***仿冲洗(注意: 有机玻璃器具因可被***仿腐蚀, 故不能使用) 。 3. 有机玻璃的电泳槽等,可先用去污剂洗涤,双蒸水冲洗,乙醇干燥,再浸泡在 3% H 2 O 2 室温 10min,然后用 % DEPC水冲洗,晾干。 4. 配制的溶液应尽可能的用 % DE PC,在 37℃处理 12hr以上。然后用高压灭菌除去残留的 DEPC。不能高压灭菌的试剂,应当用DEPC处理过的无菌双蒸水配制,然后经 。 5. 操作人员戴一次性口罩、帽子、手套,实验过程中手套要勤换。 6. 设置RNA操作专用实验室,所有器械等应为专用。 二、常用的RNA酶抑制剂 1 . 焦磷酸二乙酯(D E P C) : 是一种强烈但不彻底的R N A 酶抑制剂。它通过和R N A 酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性,从而抑制酶的活性。 热线电话: 021 - 6485 8053 8009881995 E - mail:******@.cn