文档介绍：LUOYANG NORMAL UNIVERSITY 201 5 届毕业论文乳酸菌的分离纯化及抑菌实验院(系)名称生命科学学院专 业名称生物技术学 生姓名勾倩倩学 号 11 13440 45 指 导老师易力副教授完 成时间 201 5年5月7日 1 乳酸菌的分离纯化及抑菌实验勾倩倩生命科学学院生物技术专业学号: 111344045 指导教师:易立副教授摘要:本文对乳酸菌的分离纯化,革兰氏染色以及抑菌实验进行阐述,从市售酸菜中分离纯化得到乳酸菌,革兰氏染色进行鉴定,最后进行金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌实验!实验主要是分离纯化,革兰氏染色,最后用抑菌实验比较单菌株的抑菌能力。关键词:乳酸菌:分离纯化;革兰氏染色;抑菌乳酸菌(LA B,Lactic acid bacteria) 是指能使碳水化合物(主要为葡萄糖)发酵产生大量乳酸的细菌的通称,这类细菌生长在矿物质和有机营养丰富的微酸性环境中[1,2] 。在自然界中比较常见,用途广泛,它可以改善食物的风味,并延长食品的货架期, 作为保健食品和药品,可以改善和提高人的健康水平,延年益寿,还可以作为微生物学和微生态学领域研究的模式生物[3] 。酸菜是世界性大众化蔬菜腌制品, 在我国历史悠久[4] ,其自然发酵的主要菌群是乳酸菌[5] 。人体在摄人发酵酸菜时,也同时摄入了大量的乳酸菌体及其代谢产物[6] 。乳酸菌是酸菜发酵过程中的有益菌,在发酵速度以及发酵产品品质等方面都起到至关重要的作用。因此在微生物学和食品科学的研究中,对酸菜中乳酸菌进行鉴定是必要的[7]。本实验从酸菜中分离纯化得到 6株乳酸菌( 1,2,3,4,5,6 ), 进行革兰氏染色,为紫色杆状,最后进行抑菌实验,比较 6株乳酸菌的抑菌能力。 1材料与仪器 菌种乳酸菌 样品来源市售新鲜酸菜 2 培养基(1)乳酸菌分离培养基(固体 MRS 培养基):蛋白胨 5g,酵母膏 ,牛肉膏 5g, 葡萄糖 10g ,磷酸氢二钾 1g,柠檬酸铵 1g,乙酸钠 ,硫酸镁 ,硫酸锰 , 吐温 mL,琼脂 ,蒸馏水 500mL , (2)乳酸菌纯化培养基:MRS 培养基+1% 的碳酸钙溶液(碳酸钙 1g,蒸馏水 100mL ) (3)乳酸菌富集培养培养基(液体 MRS 培养基):蛋白胨 5g,酵母膏 ,牛肉膏5g,葡萄糖 10g ,磷酸氢二钾 1g,柠檬酸铵 1g,乙酸钠 ,硫酸镁 , ,吐温 mL,蒸馏水 500mL , (4)抑菌实验培养基(牛肉膏蛋白胨培养基):牛肉膏 ,蛋白胨 5g, NaCl , 琼脂粉 ,水 500mL , pH7. 2 仪器及用具恒温培养箱,高压蒸汽灭菌锅,超净工作台,培养皿,锥形瓶,移液枪,涂布棒, 接种针 2方法与过程 酸菜中菌种的分离培养(平板涂布法) 吸取汤汁 ,加入 9ml 无菌水中进行 100 倍稀释,依次做 5个梯度,每个梯度分别取 涂布于灭好菌 MRS 培养基中,并尽快用无菌玻璃涂棒将菌液在平板上涂布均匀,然后用封口膜封住培养皿,平放于试验台上 20min ,然后倒置于 37℃恒温箱中培养 48h 。 酸菜中菌种的纯化培养(平板划线法) 48h 无菌条件下,从培养基中挑选不同的菌落,放入 无菌水中稀释,用接种环挑取菌液,用平板划线法接入含有 1%碳酸钙的 MRS 培养基,用封口膜密封培养皿,倒 3 置放在 37℃恒温培养箱中培养 48小时。 革兰氏染色在洁净的载玻片上加蒸馏水一滴,然后用接种环分别挑选取少量培养基透明圈中的单菌落与水滴混匀,涂开,而后将此玻片在酒精灯火焰上通过 3—4 次,使细菌固定在载玻片上。然后,加草酸铵结晶紫液,染 1—2min ,水洗并除尽水滴。然后在涂片上滴加碘液,染 1—2min 除尽水滴。而后在涂片上,滴加复红乙醇溶液,维持 1min ,水洗, 用吸水纸轻轻吸干,最后进行油镜镜检。 抑菌实验首先用打孔器制作药敏片并高温灭菌。然后把培养在液体培养基里的乳酸菌倒在灭过菌的培养皿上,做好的药敏片放在里边浸泡 20分钟左右,拿出来沥干(药敏片仍然 4 是湿的,但是没有水珠)。其次,倒平板,分别涂布金黄色葡萄球菌和大肠杆菌。最后, 每个培养皿放 4个药敏片。用封口膜密封培养皿,倒置放在 37℃恒温培养箱中培养 24 小时。 保种甘油和乳酸菌菌液 1:1 放在冻存管中,放在冰箱—20℃保存。 3实验结果 分离培养结果乳酸菌菌落大约 1-3 mm,圆形隆起,表面光滑,呈乳白色、灰白色或暗黄