文档介绍：收稿日期:20102 052 04;修订日期:20102 072 01 基金项目:中央高校基本科研业务费专项(2009B18214 )资金资助作者简介:李颖(1978- ),女,讲师;E2 mail:******@hhu. 苯***蓝黑与人血清白蛋白的相互作用及对其构象的影响李颖(河海大学环境学院,浅水湖泊综合治理与资源开发教育部重点实验室,南京 210098 ) 摘要:利用荧光光谱和同步荧光光谱研究了不同温度下苯***蓝黑与人血清白蛋白相互作用时的荧光猝灭及构象的变化情况。实验结果表明,苯***蓝黑与人血清白蛋白之间可以发生相互作用,而且有较强的结合。同步荧光光谱研究了人血清白蛋白与苯***蓝黑的相互作用中人血清白蛋白构象的变化,结果显示二者结合改变了蛋白质的微环境。热力学参数说明小分子与蛋白质的作用以疏水作用为主。关键词:苯***蓝黑;人血清白蛋白;荧光光谱;相互作用中图分类号:O6571 3 文献标识码:A 文章编号:10002 0720 (2010 )112 0912 03 偶氮染料是偶氮基两端连接芳基的一类有机化合物,按分子中所含偶氮基数目可分为单偶氮、双偶氮、三偶氮和多偶氮染料,随着偶氮基数目的增加,染料的颜色加深。在特殊条件下,它能分解产生 20多种致癌芳香***,经过活化作用改变人体的 DNA结构引起病变和诱发癌症。苯***蓝黑是偶氮类有机化合物中的一种,用于羊毛、蚕丝、锦纶及其混纺织物的染色和直接印花。人血清白蛋白(HSA )能和许多内源及外源化合物结合,起到存储和转运作用[1]。人血清白蛋白具有许多重要的生理功能,能够和氨基酸、激素、药物[2~ 4]、有毒污染物分子[5]等许多物质结合。以它作模型蛋白质研究其与小分子的相互作用,有助于了解小分子在体内的转运和代谢、蛋白质结构与功能的关系。本研究在生理条件下,采用光谱学方法研究苯***蓝黑对蛋白质结构影响,从分子水平上认识苯***蓝黑与血清白蛋白的结合方式,对了解偶氮类化合物在体内的代谢过程及生物效应,对研究其中毒机制及指导解毒等方面都具有重要的价值。 1实验部分 11 1仪器与试剂 LS2 50B型荧光分光光度计(PERKIN2 ELMER 公司);苯***蓝黑(上海标本模型厂),储备液(11 0 × 10 -3mol/L )用无水乙醇配制;人血清白蛋白(Sigma2 Aldrich生物技术公司),用 pH71 40Tris2 HCl缓冲溶液配制,储备液(11 5× 10 -5mol/L )保存于 4℃冰箱内;三羟基***氨基甲烷2盐酸(Tris2 HCl )缓冲溶液(pH71 40 )用 01 10mol/L的 Tris和 01 10mol/LHCl配制;11 0mol/LNaCl溶液。实验用水为超纯水,其它试剂均为分析纯。 11 2实验方法 11 21 1荧光光谱 LS2 50B荧光分光光度计记录样品荧光光谱和荧光强度,使用狭缝宽度为 5nm/ 5nm。以 280nm为激发波长,扫描 300~ 500nm 范围的荧光光谱。实验过程中用循环恒温水浴控制样品温度。 11 21 2荧光滴定实验在 3mL含有 HSA的溶液中,以微量注射器逐次加入不同体积的苯***蓝黑储备液,为使反应完全设定反应时间为 2min。以 280nm/344nm为激发波长、发射波长,记录体系在不同温度下的荧光强度值。所得数据利用 Scatchard方程计