文档介绍：选修3易考知识点背诵
专题1 基因工程
基因工程的概念
基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，
通过体外DNA重组和转基因技术， 赋予生物以 新的遗传 特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产 品。基因工程是在 DNA分子水平 上讲行设计和施工的, 又叫做DNA重组技术。
基因工程的基本工具
“分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶(限制酶)
来源：主要是从 原核生物中分离纯化出来的。
功能：能够识别双链 DNA分子的某种 特定的核苷
酸序列，并且使每一条链中 特定部位的两个 核苷酸之间的 磷酸二酯键 断开，因此具有 专 二性。
结果：经限制酶切割产生的 DN***段末端通常有
两种形式：黏性末端 和平末端。
“分子缝合针” 一一DNA连接酶
⑴两种DNA连接酶(E- coliDNA连接酶和T4-DNA连接 酶)的比较：
相同点：都缝合 磷酸二酯 键。
区别：E- coliDNA连接酶来源于T4噬菌体，只能将
双链DN***段互补的黏性末端之间的磷酸二酯 键连接起来；而T4DNA连接酶能缝合两种末端， 但连接平末端的之间的效率较 低。
⑵与DNA聚合酶作用的异同：DNA聚合酶只能将单个核 苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯 键。DNA连接酶是连接两个
DN***段的末端,形成磷 酸二酯键。
3•“分子运输车”——载体
（1） 载体具备的条件：① 能在受体细胞中复制并稳定 保存。
具有一至多个限制酶切点， 供外源DN***段插入。
具有标记基因，供重组 DNA 的鉴定和选择。
（2） 最常用的载体是 质粒,它是一种裸露的、结构简单 的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能 力的双链环状DNA分子。
（3） 其它载体： 噬菌体的衍生物、动植物病毒
（二）基因工程的基本操作程序
第一步：目的基因的获取
目的基因是指： 编码蛋白质的结构基因 。
原核基因采取 直接分离获得，真核基因是 人工合成。 人工合成目的基因的常用方法有 反转录法_和化学合 成法。
原理：DNA双链复制
过程：第一步：加热至 90〜95C DNA解链；第二 步：冷却到55〜60C,引物结合到互补 DNA链；第三 步：加热至70〜75C,热稳定DNA聚合酶从引物起始 互补链的合成。
第二步： 基因表达载体的构建
目的：使目的基因在受体细胞中 稳定存在，并且可以 遗传至下一代，使目的基因能够
表达和发挥作用。
组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因
启动子：是一段有特殊结构的 DN***段，位于基 因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基 因转录出mRNA最终获得所需的 蛋白质。
终止子：也是一段有特殊结构的 DN***段，位于 基因的尾端。
标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中 是否含 有目的基因，从而将含有目的基因的细胞 筛选出来。常 用的标记基因是抗生素基因。
第三步： 将目的基因导入受体细胞 _
转化的概念：是目的基因进入受体细胞内， 并且在受
体细胞内维持稳定和表达的过程。
常用的转化方法：
将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是 农杆菌
转化法，其次还有 基因枪法和花粉管通道法等。
将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是 显微注射
技术。此方法的受体细胞多是 受精卵。
将目的基因导入微生物细胞： 原核生物作为受体细胞的 原因是 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少 ，最
常用的原核细胞是 大肠杆菌，其转化方法是：先用_C a2处理细胞，使其成为 感受态细胞，再将重组表
达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在 一定的温度下促进感受态细胞吸收
DNA分子，完成转化
过程。
重组细胞导入受体细胞后，筛选含有基因表达载体受 体细胞的依据是标记基因是否表达。
第四步：目的基因的检测和表达
首先要检测 转基因生物的染色体 DNA上是否插入了
目的基因，方法是采用 DNA分子杂交技术。
其次还要检测 目的基因是否转录出了 mRNA方法是 采用 用标记的目的基因作探针与 mRNA杂交。
最后检测 目的基因是否翻译成蛋白质，方法是从转 基因生物中提取 蛋白质，用相应的 抗体进行抗原一 抗体杂交。
有时还需进行 个体生物学水平 的鉴定。如 转基因抗 虫植物是否岀现抗虫性状 。
（三）基因工程的应用
植物基因工程：抗虫、抗病、抗逆转基因植物，利用
转基因改艮植物的品质。" 、 ~~:
动物基因丄程: 生长速度、改善畜产品品质、
基因治疗:把正常的外源基因导入病人体内， 使该基 因表达产物发挥作用。
（四）蛋白质工程的概念
蛋白质工程是指以 蛋白质分子的结构规律及其生物