文档介绍：基因工程
一名词解释
1、 限制与修饰系统：限制酶的生物学功能一般被认为是用来保护宿主细胞不受外源 DNA的感染，可讲解外来 DNA 从而阻止其复制和整合到细胞中。一般来说，与限制酶相伴而生的修饰酶是***转移酶，或者说是***化酶，能保护
自身的DNA不被讲解。限制酶和***转移酶组成限制与修饰系统。
2、 各种限制与修饰系统的比较
n型
I型
川型
识别位点
：4~6bp，大多为回文序列
二分非对称
5~7bp非对称
切割位点
P在识别位点中或靠近识别位点
无特异性，至少在识别位点外 100bp
识别位点下游24~26bp
简答
activity 简述Star activity 的影响因素及克服方法
答：在极端非标准条件下，限制酶能切割与识别序列相似的序列，这个改变的特征称为星星活性。
引起星星活性的的因素：①高甘油浓度（ ＞5%;②酶过量（＞100U/卩I ）;③低离子强度（＜25mmol/L）;④高
pH （＞ ;⑤有机溶剂如 DMSO （二***亚砜）、乙醇、乙二醇、二***乙酰***、二***甲酰***等；⑥用其它二价阳
离子 Mn2+、Cu2+、Co2+ 或 Zn2+ 代替 Mg2+。
星星活性的抑制措施：①减少酶的用量，避免过量酶切，减少甘油浓度；②保证反应体系中无有机溶剂或乙
醇；③提高离子强度到 100〜150mM （在不抑制酶活性的前提下）；④降低反应pH至；⑤使用Mg2+作为二价 阳离子。
2、 试回答影响限制性内切核酸酶切割效率的因素 （影响酶活性的因素）
答：外因：反应条件、底物纯度（是否有杂质、是否有盐离子和苯酚的污染） 、何时加酶、操作是否恰当，反应体系
的选择、反应时间的长短
内因：星星活性、底物***化、底物的构象
3、 DNA末端长度对酶切割的影响
答：限制酶切割 DNA时，对识别序列两端的非识别序列有长度要求，也就是说在识别序列两端必须要有一定数量的 核苷酸，否则限制酶将难以发挥切割活性。在设计 PCR引物时，如果要在末端引入一个酶切位点，为保证能够顺利切
割扩增的PCRT物，应在设计的引物末端加上能够满足要求的碱基数目。一般需加 3〜4个碱基对。
4、 何为载体一个理想的载体应具备那些特点
答：将外源DNA或目的基因携带入宿主细胞的工具称为载体。载体应具备：①在宿主细胞内必须能够自主复制（具 备复制原点）；②必须具备合适的酶切位点，供外源 DN***段插入，同时不影响其复制；③有一定的选择标记，用于
筛选；④其它：有一定的拷贝数，便于制备。
5抗性基因（Resista nt ge ne ）是目前使用的最广泛的选择标记，常用的抗生素抗性有哪几种并举两例说明其原理
答：氨苄青霉素抗性基因（ampr）、四环素抗性基因（tetr ）、***霉素抗性基因（Cm）、卡那霉素和新霉素抗性基因 （kanr , neor、以及琥珀突变抑制基因 supF 。
⑴青霉素抑制细胞壁肽聚糖的合成 ，与有关的酶结合，抑制转肽反应并抑制其活性。氨苄青霉素抗性 Ampr编码一个
酶，可分泌进入细胞的周质区，并催化 3-内酰***环水解，从而解除氨苄青霉素的毒性。
⑵四环素与核糖体 30S亚基的一种蛋白质结合,从而抑制核糖体的转位。 Tetr编码一个由399个氨基酸组成的膜