文档介绍：实验一 DNA的小量制备
小量法提取植物基因组DNA（CTA法）
1实验目的：
随着基因工程等分子生物学技术的迅速发展及广泛应用，人们经常需要提取高 分子量的植物DNA用于构建基因文库、基因组southern 分析、酶切及克隆等，这 是研究基因结构和功能的重要步骤。本实验目的是学习从植物材料中提取和测定 DNA 的原理并掌握CTAB提取DNA的方法，进一步了解DNA的性质。
2实验原理
细胞中的DNA绝大多数以DNA蛋白复合物（DNP的形式存在于细胞核内。提取 DNA时，一般先破碎细胞释放出DNP再用含少量异戊醇的氯仿除去蛋白质， 最后用
乙醇把DNA从抽提液中沉淀出来。DNP与核糖核蛋白（RNP在不同浓度的电解质溶 液中溶解度差别很大，利用这一特性可将二者分离。以 NaCI溶液为例：RNP在
NaCI中溶解度很大，而DNP在其中的溶解度仅为纯水中的1%。当NaCI浓 度逐渐增大时，RN的溶解度变化不大，而DNP的溶解则随之不断增加。当NaCl浓 度大于1mol/L时，DNP勺溶解度最大，为纯水中溶解度的 2倍，因此通常可用
NaCl提取DNA为了得到纯的DNA制品，可用适量的RNase处理提取液， 以降解DNA中搀杂的RNA
关于植物总DNA的提取主要有两种方法：
CTAB法：
CTAB（十六烷基三甲基溴化铵，hexadecyltrimethylammo nium bromide, 简称 CTAB：是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液 中（ ）是可溶的，当降低溶液盐的浓度到一定程度（ mol/L NaCl） 时从溶液中沉淀，通过离心就可将 CTAB与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分开， 然后将CTAB与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液中， 再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB 能溶解于乙醇中。
SDS 法:
利用高浓度的阴离子去垢剂SDS十二烷基磺酸钠，Sodiumdodecyl sulfate, 简 称SDS使DNA与蛋白质分离，在高温（55〜65C）条件下裂解细胞，使染色体离析， 蛋白变性，释放出核酸，然后采用提高盐浓度及降低温度的方法使蛋白质及多糖杂 质沉淀，离心后除去沉淀，上清液中的 DNAB酚/氯仿抽提，反复抽提后用乙醇沉淀 水相中的DNA 一般生物体的基因组DNA为107~109bp,在基因克隆工作中，通常要 求制备的大分子DNA的分子量为克隆片段长度的4倍以上，否则会由于制备过程中 随机断裂的末端多为平末端，导致酶切后有效末端太少，可用于克隆的比例太低， 严重影响克隆工作。因此有效制备大分子 DNA的方法必须考虑两个原则：（1）尽量 去除蛋白质、RNA次生代谢物质（如多酚、类黄酮等）、多糖等杂质，并防止和抑 制内源DNase对DNA的降解。（2）尽量减少对溶液中DNA的机械剪切破坏。
几乎所有的DNase都需要Mg2或Mn2+为辅因子，故实现（1）尽量去除蛋白质的 要求，需加入一定浓度的螯合剂，如 EDTA柠檬酸，而且整个提取过程应在较低温 度下进行（一般利用液氮或冰浴）。为实现（2）需要在DNA处于溶解状态时，尽量
减弱溶液的涡旋，而且动作要轻柔，在进行DNA溶液转移时用大口 （或剪口）吸管＜ 提取的DNA是否