细胞数的测定(血球计数板的使用方法).docx

文档介绍：细胞数的测定
一、 目的与要求
了解血球计数板计数的原理，学会测定细胞总数方法。
二、 原理
用血球计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生物计数方 法。血球计数板是一块特制的厚载玻片，其上由四条槽构成三个平台， 中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个 方格网，每个方格网共分为9个大方格，中间的大方格即为 计数室。 计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成16个中方格, 每个中方格又分成25个小格（即16x25），另一种是一个大方格分成 25个中方格，每个中方格又分为 16个小方格（即25X 16），但无论 是哪一种规格的计数板，每一个大方格中的小方格都是400个，每一 个大方格边长为1 mm则每一个大方格的面积为1 mn2，盖上盖玻片 后，盖玻片与载玻片之间的高度为
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三、血球计数板的使用方法
（一） 菌悬液的制备 为便于计数，对样品进行适当稀释，稀释 程度以每小格内含5〜10个酵母为宜，可采用10倍系列稀释法。
（二） 加菌悬液样品 将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片， 再
用无菌的毛细滴管将摇匀的菌悬液由盖玻片边缘滴一小滴， 让菌液沿
缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室， 用吸水纸吸去多余水液。由盖 玻片边缘或槽内加入计数板来回推压盖玻片，使其紧贴在计数板上， 计数室内不能有气泡。静置5-10分钟。
（三）显微镜计数在低倍镜下找到小方格网后更换高倍镜观察计
数，上下调动细螺旋，以便看到小室内不同深度的菌体。位于分格线 上的菌体，只数两条边上的，其余两边不计数。如数上线就不数下线， 数左边线就不数右边线。当芽孢菌体达到母细胞大小的二分之一时， 可记作两个细胞。
（四） 计数时若使用刻度为25X 16 （大格）的计数板，则数四角 的4个大格（即100小格）内的菌数。如用刻度为16X 25 （大格） 的计数板，除数