文档介绍：质粒提取方法及步骤
碱裂解法从大肠杆菌制备质粒,是从事分子生物学研究的实验室每天都要用的常规技术可是我收研究生十几年了，几乎毫无例外的是我那些给人感觉什么都知道的优秀学生却对碱法质粒抽提的原理知之甚少追其原因,我想大概是因为分子克隆里面只讲实验操作步骤,而没有对原理进行详细的论述这是导致我的学生误入歧途的主要原因后来我发现其实是整个中国的相关领域的研究生水平都差不多，甚至有很多老师也是这个状态这就不得不让人感到悲哀了
我想这恐怕和我们的文化有点关系中国人崇尚读书,学而优则仕的观念深入人心经常听到的是父母对他们的独苗说，你只要专心读好书就可以了所以这读书的定义就是将教课书上的东西记住，考试的时候能拿高分这就是现代科学没有在中国萌发的根本原因如果中国文化在这一点上不发生变化，那么科学是不能在中国真正扎根的，它只能蜕化成新的八股学生命科学是实验科学，它讲究动手如果实验科学只要看看书就可以了，那我想问有那位神仙看看书就会骑自行车了?或者听听体育老师的讲解就会滑冰了？可是光动手不思考,不就成了一个工匠？一个合格的生命科学研究者,需要在这两方面完善自己一个杰出的科学工作者,是一个熟知科学原理并善于应用的艺术家每个曾经用碱法抽提过质粒的同学,希望你看本文后能有所思考，让中国的未来有希望
为了方便理解,这里罗列一下碱法质粒抽提用到三种溶液：
溶液I ，５０ mM葡萄糖 / 25 ｍM Triｓ-Ｃｌ / １0 mM EDTA，pH ;
溶液ＩI ， N NaＯH / 1％ SDS；
溶液ＩIＩ ,3 Ｍ 醋酸钾 / ２ Ｍ 醋酸
让我们先来看看溶液Ｉ 的作用任何生物化学反应,首先要控制好溶液的pＨ ，因此用适当浓度的和适当pＨ 值的Tｒis-Cl 溶液,是再自然不过的了那么50 ｍＭ葡萄糖是干什么的呢?说起来不可思议,加了葡萄糖后最大的好处只是悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部因此,如果溶液I 中缺了葡萄糖其实对质粒的抽提本身而言，几乎没有任何影响所以说溶液Ｉ 中葡萄糖是可缺的那么ＥDＴA 呢？大家知道EDTＡ 是Ca２＋和Mg2+等二价金属离子的螯合剂，配在分子生物学试剂中的主要作用是：抑制DNase 的活性，和抑制微生物生长在溶液Ｉ 中加入高达 10 mM 的EＤTA ，无非就是要把大肠杆菌细胞中的所有二价金属离子都螯合掉如果不加ＥDTA ，其实也没什么大不了的,只要不磨洋工，只要是在不太长的时间里完成质粒抽提，就不用怕ＤNA 会迅速被降解，因为最终溶解质粒的TE 缓冲液中有ＥDＴA 如果哪天你手上正好缺了溶液I ，可不可以抽提质粒呢？实话告诉你，只要用等体积的水,或LB 培养基来悬浮菌体就可以了有一点不能忘的是，菌体一定要悬浮均匀，不能有结块
轮到溶液II 了这是用新鲜的０。4 N的ＮaOH 和2％的SDS 等体积混合后使用的要新从浓NaOH 的NａＯＨ ,无非是为了保证ＮaOH 没有吸收空气中的CＯ２而减弱了碱性很多人不知道其实破细胞的主要是碱，而不是SＤS ，所以才叫碱法抽提事实上NａOH 是最佳的溶解细胞的试剂，不管是大肠杆菌还是哺乳动物细胞，碰到了碱都会几乎在瞬间就溶解，这是由于细胞膜发生了从bilayer （双层膜)结构向miｃelle (微囊）结构的相变化所导致用了不新鲜的0。4 N NaOＨ