文档介绍：重庆医科大学
博士学位论文
SHH信号通路核转录因子Gli1在肝癌中的作用研究
姓名:刘靳波
申请学位级别:博士
专业:临床检验诊断学
指导教师:涂植光
20090401
眂龋谥琢龇⑸⒄怪蟹⒒幼胖匾W饔谩S绕动物中都存在的中轴器官发育的形态发生通路。拘藕磐分饕藕磐泛俗B甲覩诟伟┲的作用研究摘要究发现,藕抛5纪吩诙嘀掷丛从谀谂卟愕淖橹鞴僦琢肝癌是世界第六大常见恶性肿瘤,其中肝细胞肝癌,是最主要的类型,在全球癌症病死率中已上升至第三位,在国内居第二位,严重危害人类的健康。其侵袭力强,易转移,预后差。肝癌的发生和发展机制虽然经过了人们几十年的努力研究,仍然未能阐明。近年来研究发现,在胚胎发育、组织分化特定过程中调控细胞分化与增殖的信号通路,如、和是控制脊椎动物内胚层发育分化的信号通路之一的藕抛5纪罚且桓龈叨缺J氐拇庸郊棺由分泌型信号糖蛋白涮濉⒖缒さ鞍资芴錚餷蛋白偶联磷酸化受体槌傻母春衔铮约跋掠巫B家蜃覩蛋白组成。随后研中异常激活,如皮肤基底细胞癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、结直肠癌、食道癌、乳腺癌和肝癌等。繁J氐卮嬖谟诟细胞的整个生命过程,从内胚层肝前体细胞、胚胎干细胞到成体肝重庆医科大学博士研究生学位论文
调控下游基因研究甚少。结合生物信息学分析和相关文献线索,发通路信号因子在肝细胞肝癌中的分布及激活情况,集中探讨等技术,分别检测肝癌细胞、细胞等各期均有藕诺挠Υ穑魑R鸶蜗赴伟┒裥宰化的信号通路之一,其所起的具体作用和机制仍有待于阐明。藕磐分械暮俗B家蜃覩有郑直鹈狦、,諫蛋白之间氨基序列十分相似,都含有龈叨保守的串联锌指结构以及它们之间的组氨酸一半胱氨酸连接序列。但諫蛋白却发挥不同的核转录激活或抑制功能,仅有激活功能,而、同时具有转录激活与抑制活性。研究显示种鞍椎腃末端均存在激活区;但、的嘶勾嬖转录抑制区域。┒四苡肫渌肿幼饔媒ê俗B家蜃佣ㄎ挥谙赴质内,而┒嗽虼偈蛊湎蚝四谧R啤D壳岸訥难芯慷嗍其上游如何导致其核转录因子功能状态的变化,而对是怎样现癌基因甿是调控的下游靶基因之一,由于蛋白在细胞中的具体定位还没有统一的结论,在蠫欠竦骺甿功能及作用,值得进一步探讨。为此,本课题以藕抛5纪肺G腥氲悖紫燃觳釹转录调控下游癌基因甿的机制,了解在肝癌细胞增殖、凋亡及功能等方面的作用,最后研究体内体外阻断引起的生物学行为改变。首先,我们采用、细胞免疫化学和.⒚疫化学、重庆医科大学博士研究生学位论文
信号通路和甿呈激活状态,⒃蜗赴鸓和临床肝癌组织及癌旁组织中藕乓蜃及的表达。结果提示犯餍藕乓蜃釉诟伟┫赴鸋和矢表达,实捅泶铮琍则无表达;临床肝细胞肝癌标本中和,以及蛞斐<せ睿赡苡敫伟┓⑸⒄褂关。在上述工作的基础上,我们构建了含和的甿荧光素酶启动子质粒、表达质粒和干扰质粒,利用共转染技术和双荧光素酶分析系统,发现原本无或低表达的的荧光素酶表达,。为了解能否激活内源性甿的表达和不同表达水平对细胞生长的影响,我们筛选出过表达的稳定赴旰蛃质粒抑制基因的赴辍畉蚖实验表明上述稳定细胞株中与甿表达水平均呈正相关,说明能够激活内源性甿的表达,赴鲋呈笛橹な礕诟伟┫胞增殖中起正调控作用。为进一步揭示在肝癌细胞内发挥生物学功能的可能分子机制,我们通过免疫共沉淀珻甀及细胞内免疫荧光共定位实验,证实了和甿两者间存在相互重庆医科大学博士研究生学位论文写
并减少肝细胞癌标志物甲胎蛋白的表达和分泌。我们又建立了中异常激活,该通路中的核转录因子可调控癌基因甿转抑制肝癌生长和促进早期凋亡发生。在肝癌细胞增殖、凋亡等作用。为揭示抑制后对肝癌的生物学行为影响,我们采用通路特异性抑制剂饔糜贖细胞,发现哂幸种聘伟┫赴ず痛俳缙诘蛲龇⑸淖饔茫赴臀榷ㄒ种艷虻腍细胞裸鼠肝原位移植瘤模型,通过瘤体积测定、染色、和免疫组化技术,观察到晕榷ㄒ种艷虻腍细胞裸鼠肝原位移植瘤有协同抑制作用,其机制与抑制,下调甿表达有关。以上研究结果初步证明,藕抛5纪吩谠诟蜗赴伟录和表达,参与肝癌的发生发展。阻断可以下调甿表达,过程中发挥重要作用,可能为肝癌治疗的新靶点。关键词:肝癌,,转录激活,细胞增殖,原位移植瘤重庆医科大学博士研究生学位论文
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