文档介绍：重组艾塞那RP-HPLC法肽图分析
［摘要］a的建立并验证胰蛋白酶裂解-反向高效液相色谱法进行重 组艾塞那肽肽图分析研究。方法将重组艾塞那肽样品用胰蛋白酶水解，酶 解所得的肽段通过反相高效液相色谱法进行分析，采用cs色谱柱，以0. 1% 三***乙酸(TFA)的水溶液为流动相A,以0. 1%TFA的乙睛溶液为流动相B, 梯度洗脱70min,得到重组艾塞那肽肽图，以此进行方法的专属性、重现 性、定量限、批间同一性研究。结果本实验室制备的重组艾塞那肽可以通 过胰蛋白酶裂解RP-1IPLC法进行肽图分析，专属性、重现性均满足要求, 定量限为0. 125mg/niL,三个批次间的肽图谱也完全一致。结论表明此方法 简便可靠、准确度高、重复性好，验证硏究可行，可用于重组艾塞那肽的 质量控制。
［关键词］重组艾塞那肽；肽图；胰蛋白酶裂解；高效液相色谱；方法 研究；质量控制
艾塞那肽(Exendin-4)是毒蜥唾液腺中分泌的一种胰高血糖素样肽 -1(GLP-1)类似物，为含有39个氨基酸的多肽。该产品首次由美国Amyl in 制药公司开发合成，目前国内市场由瑞典阿斯利康公司进口销售，在临床 中已大量应用，降低餐后血糖效果好见效快，主要用于控制血糖，减轻体 重，改善胰岛素抵抗。冃前该药品无其他公司生产，且无药典收藏质量标 准。本实验室通过前期的研发，自主构建载体，利用基因工稈技术在大肠
杆菌体内重组表达艾塞那肽，经过纯化、浓缩、冻干等工艺，得到重组艾 塞那肽。
冃前，控制基因工程药物一致性的一个重耍手段就是肽图分析
（peptide mapping analysis）,肽图分析技术灵敏高效的特点使其成为 对基因工程药物的分子结构和遗传稳定性进行验证的首选方法。该技术不 但可以比较重组与天然蛋白质结构Z间的差别，还可帮助判别样品在生产 过程中是否发生了变化，以验证生产工艺和样品的稳定性，所以肽图分析 也是考察供试品与对照品之间以及不同批次产品之间同一性的重要手段。 本研究采用胰蛋白酶对重组艾塞那肽进行酶解，以RP-HPLC法对酶解的肽 段进行分析，与合成艾塞那肽进行一致性比对，并对3批重组艾塞那肽进 行了肽图分析，建立重组艾塞那肽的质量控制方法以及验证研究，得到较 好的结果。
1仪器与试剂
1・1仪器
高效液相色谱仪（Agilent 1260）；电子天平（Sartorius BSA224S-CW）； 超纯水仪（MilliporeMilli-Q）；超声仪（舒美KQ-300VDV）；真空泵（天 津 GM-）；水浴锅（Fisher215）o
2试剂材料
乙腊（色谱醇，Fisher公司，L0T136911）；三***乙酸（分析纯，sigma, BCBJ6836V）；磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、碳酸氢钱、醋酸等（分析纯，国 药集团化学试剂有限公司）;胰蛋白酶（Sigma, L0TWSLBF1700V）；艾塞那
肽合成品（上海吉尔生化冇限公司，批号P140218）；重组艾塞那肽（自制, 批号Exl50108、Exl50322、Exl50603）；其他试剂均为分析纯。
2方法与结果
1色谱条件
经反复实验后，确定重组艾塞那肽纯度测定的实验色谱条件：色谱柱 Agilen t ZORBAX Eclipse C。（4. 6x250mm,粒径 5um）；