淋巴细胞分离.pptx

文档介绍：淋巴细胞的分离技术与培养
细胞分离原理与手段
基于对细胞物理特性
1 细胞比重差异（自然沉降法、密度梯度离心法、改变细胞密度法）
2 细胞的粘附性（贴壁细胞对玻璃、塑料器皿的粘附，B细胞对尼龙棉的粘附）
3 细胞对渗透压改变的敏感性（红细胞对低渗敏感，低渗处理，能使其裂解）
基于细胞表面的特异性标志物
1 补体细胞毒分离法
2 免疫磁珠分离法
3 流式细胞术
血液细胞的组成及比重
外周血
红细胞
粒细胞
单个核细胞
血小板
淋巴细胞
单核细胞

~
~
(PBMC)

单个核细胞的特点
单核细胞：贴壁生长，能吞噬羟基铁粉
淋巴细胞：悬浮生长
1 粘附力：B细胞——尼龙棉
2 细胞表面标志物
T细胞：CD2、CD3、CD4、CD8、CD25等
NK细胞：CD2、CD8、CD16、CD56等
淋巴细胞分离的流程
密度梯度离心法
粘附去除
改变细胞密度法
E花环分离法
尼龙棉分离法
流式细胞术
磁珠分离法
2
3
单个核细胞的分离 —密度梯度离心法
原理： 外周血各种血细胞的比重不同，利用淋巴细胞分层液作密度梯度离心，使一定比重的细胞群按相应密度梯度分布，从而将各种血细胞加以分离。
～（分层液）做密度梯度离心，使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，从而将各种血细胞加以分离。

常用的分层液有Ficoll和Percoll两种。
密度梯度离心法
Ficoll：±
Percoll常用密度
20%
30%
40%
50%
60%
70%
细胞
比重
血小板
~
单个核细胞
~
粒细胞

红细胞

细胞比重
分层液比重
离心后
PBMC
红细胞粒细胞
Ficoll/60% Percoll
稀释外周血
稀释的血浆、血小板
Ficoll/60% Percoll
实验步骤

，稀释
（外周血：稀释液=1：2）
，沿倾斜的管壁缓缓加入稀释的外周血
（Ficoll：稀释血=1：2）