文档介绍:人肉眼对光源波长的颜色感觉
红色 770-622 nm
橙色 622~597 nm
黄色 597~577 nm
绿色 577~492 nm
蓝靛色 492~455nm
紫色 455~350nm
荧光类型
生产厂家
激发光(nm)
发射光(nm)
颜色
GFP蛋白
395-495
509
绿色
EGFP蛋白
487
509
绿色
DAPI
358-360
460-461
蓝色
Alexa Fluor 488
Invitrogen
495
519
绿色
Alexa Fluor 594
Invitrogen
590
617
红色
FITC
490-495
520-530
黄绿色
罗丹明
(Rhodamine)
565
590
红色
TRITC
(Tetramethyl Rhodamin Isothiocyanate,四***异硫***酸罗丹明
550
620
橙红色
,是罗丹明的一种衍生物之一)
Rhodamine Red-X(RRX)
570
590
橙红色
Texas Red(TR)
589-595
615
橙红色
常见显微镜滤光片的波长
在激发波长在Ex围才能被激发,只有发射光波长大于BA/EM才能被观察到,背景光的波长只有大于DM才能被观察到。
红色滤光片G-2A
Ex 510-560
DM 575
BA 590
绿色滤光片B-2A
Ex 450-490
DM 505
BA 520
蓝色滤光片UV-2A
Ex 330-380
DM 400
BA 420
其它荧光染料介绍
【菁类染料-Cyanine dyes(Cy2, Cy3, Cy5)】
Cy2耦联基团激发波长为492nm,发光为波长510nm的绿色可见光。Cy2和FITC使用相同的滤波片。由于Cy2比FITC在光下更稳定。要避免使用含有磷酸化的苯二***的封片剂,因为这种抗淬灭剂和Cy2反应,在染色片储存后会导致荧光微弱和扩散。Cy3和Cy5比其他的荧光团探针要更亮,更稳定,背景更弱。Cy3耦联基团激发光的最大波长为550nm,最强发射光为570nm。因为激发光和发射光波长很接近TRITC, 在荧光显微镜中,可使用和TRITC一样的滤波片。
Cy3在氩光灯(514nm或528nm)下可以被激发出50%的光强,在氦氖灯(543nm)或者***灯(546nm)下则约75%。Cy3可以和荧光素一起作双标。Cy3还可以和Cy5一起在共聚焦显微镜实验中作多标记。Cy5耦联基团的激发波长最大650nm,发光波长最大670nm。在氪氩灯(647nm)下它们可被激发出98%的荧光,在氦氖灯下(633nm)为63%。Cy5可以和很多其他的荧光基团一起用在多标记的实验中。由于它的最大发射波长在670nm,Cy5很难用裸眼观察,而且不能用***灯作理想的激发。通常观察Cy5时采用具有合适激发光和远红外检测器的共聚焦显微镜。在水相封片剂中应当加入抗淬灭剂。使用传统的表面荧光显微镜时,不推荐使用Cy5。
【藻红蛋白或藻胆色素蛋白-Phycoerythrin(PE)荧光标记二抗】
存在于被称为藻红的多聚微粒中,位于叶绿素的反应中心