文档介绍：免疫学试验指导
生命科学和工程学院生物工程、 生物技术、 动物医学专业用
冯玉萍
[分组]: 4人/组 , 试验用动物、 器材以每组需要量设计
[班级] 生物工程 、 生物技术 [学生人数]: 65人/58人 。 分16组/15组
[时间] 3月—7月 两周一次4课时。
目 录
试验一、 免疫学试验动物通常操作
试验二、 试验动物免疫器官、 免疫细胞观察
试验三、 试验动物采血方法、 动物血清及红细胞制备方法
试验四、 淋巴细胞分离和E玫瑰花环形成试验
试验五、 IgG分离和纯化
试验六、 玻片凝集试验(ABO血型判定)
试验七、 环状沉淀试验
试验八、 琼脂扩散试验（单向）
试验九、 巨噬细胞吞噬功效试验
试验十、 白细胞吞噬试验
试验一、 免疫学试验动物通常操作
[试验原理]
试验动物基础操作是免疫学试验基础,抗原对动物机体免疫效果, 经过试验动物进行验证, 所以必需掌握试验动物通常操作技术。
[目标要求]
试验材料准备（棉球、 注射器准备和消毒）（演示）
了解免疫学试验常见动物生物学特征、 用途及其健康要求。 [自学]
学****试验动物编号、 抓取、 固定和多个不一样注射路径方法。
练****对小白鼠给药多个不一样路径注射方法。
练****小白鼠取血方法。
6、 学****血涂片制作及染色; 观察动物血液中有形成份形态结构特点。
[试验动物] 小白鼠, 2只/组, 共需18 ~ 20只。
[试剂]
⑴ 3%来苏儿或3%石炭酸 100~150 ml/组;
⑵ 无菌生理盐水100~150ml/组; 磷酸盐缓冲液20~50ml/组（带滴管、 染色用）。
⑶ 3 ~ 5% 苦味酸20~50ml/组（带滴管,编号用）;
⑷ 5%品红20ml~50ml/组（带滴管, 编号用）;
⑸ 瑞特氏（wright‘s）染色液50ml/组（带滴管, 染色用）;
*抗凝剂一支
[器材]
⑴ 1ml注射器及针头2支/组;
⑵ 碘酒棉球、 酒精棉球、 无菌干棉球各适量;
⑶ 手术剪刀2把/组; 镊子2把/组; 载玻片、 盖玻片各6片/组;
⑷ 毛细吸管2支、 50—100ml烧杯1个/组
⑸ 显微镜6台/组
[6] 鼠笼1个/组
[操作步骤]
1、 练****小白鼠抓取、 编号、 皮下注射、 皮内注射、 腹腔注射方法。 （见《免疫学试验》P9-13。
2、 练****小白鼠尾静脉取血法。 （P15）
试验汇报要求:
1、 时间、 地点、 操作人、 同组人、 指导老师。
2、 试验原理、 目标要求
3、 试验操作统计（试验步骤、 结果）
4、 分析总结: 依据试验原理、 目标要求, 分析总结试验是否成功, 是否达成试验目标？为何？
5、 对试验动物编号有何实际意义, 你对书中相关小白鼠编号方法有何想法？有没有更简便、 实用方法？
6、 若给动物注射传染性材料应注意些什么？
试验二、 免疫器官和免疫细胞观察
[试验原理]
免疫器官、 免疫细胞是动物免疫系统主体。 在胸腺、 脾脏中有大量淋巴细胞存在, 在外周血液中有大量淋巴细胞和白细胞等免疫细胞存在, 发挥着免疫监视作用。
[目标要求]
1、 练****血涂片制作
2、 学****小鼠颈椎脱臼致死方法, 观察小白鼠解剖结构;
3、 学****脾脏、 胸腺触片制备和染色方法; 观察小鼠脾脏触片、 血液涂片中免疫细胞, 并画图。
[方法和步骤]
1、 练****血涂片制作（3张/组）
1）准备一张洁净玻片, 取血1滴于玻片右侧,另取一光边玻片一端,放在血滴前方,并逐步后移接触血滴,血液立即沿推片散开,然后将推片和载片保持30一45度角,平稳地向前推进,至玻片另一端,载玻片上便留下一层血膜。 良好血膜象舌头,头、 体、 尾鲜明,厚薄适宜、 分布均匀,边缘整齐,两侧留有空隙。
2）染色:
A、 瑞特氏(WrightFs)染色法:
①.血涂片制成后可在空气中挥舞, 使快速干燥, 以免血细胞皱缩。 选择良好血片, 用特种玻璃铅笔画出两边界限(注意保留尾部, 因体积大细胞往往在此出现), 以防染液外溢。
②在血膜上滴加几滴瑞氏染色液,左右晃动, 使染液完全覆盖血膜, 注意染液不宜过多而溢出界限, 亦不能过少而干燥。
③1—2min后, 滴加等量磷酸盐缓冲液或生理盐水, 2—3min后, 可见表面有金属光泽, 即可用清水轻轻冲去染液, 待血片自然干燥或用滤纸轻轻吸干。 在正常情况下, 血膜外观染成粉红色。
3）镜检: 先在低倍镜下检验血片