文档介绍：基 因扩增检测实验及结臬分析
1、 目的：保证扩增及结果分析的标准化、规范化。
适用范围：适用于本室使用的普通离心机。
负责人：肖静操作人：胡可存蒋艺勤
4、
标准程序:
1基因扩增检测标准程序：扩增反应前须先在样木输入模板上按
照事先排好的标本位置进行设置。
每次实验除待检标本,
还需包括:
阴性对照、阳性对照、室内质控品各一份，一组阳性标准品（4个梯
度 10* 10\ 10\ 104）o 4. 1. 1打开电脑电源开关，进入Windows NT界而。
4. ，预热5分钟。
4. 1. 3双击电脑桌面的ABI Prism 5700 SDS Software图标进入程序 设置界面。
“文件”菜单中的“新建”命令，（或单击工具栏中的
“新建”按扭）。在测定、容器和模板中做相应的选择，点击0K。
4. 1・5应用检测管理程序，并将其添加到样品板文档中。
4. 1. 6检测反应管， 。运行样品板文档。
4. 2结果分析标准程序:
应按以下步骤进行：全部曲线一一阴性对照一一阳性对照一一阳性 室内质控品一一阳性标准品一一逐个分析（标出阳性标本和可疑标 木）一一调整参数，获得较好的标准曲线，显示定量结果一一登记， 发扌畏告。
4. 2. 1整体曲线的观察：将所有曲线选中进行整体观察
1） 观察是否存在污染情况（包括标本污染和试剂污染），特别应注 意大量曲线
在同一 Ct值出现上涨的情况。
2） 观察是否有光路传导阻滞或电压波动等机器原因形成的异常曲 线。
4.
阴性对照：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知阴性标 本。
作用：用以监测实验室和前处理过程中是否存在污染。
4.
阳性对照：试剂中加入与待检标本进行同样处理的己知阳性标木。
作用：用以监测实验能否正常检出阳性标本，避免假阴性的出现。
室内质控品：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知浓度室内 质控品。
作用：用以监控日常实验的精密度。
1） 各梯度曲线的分布是否均匀，若各梯度曲线均未分开，则表明 阳模稀释可能存在问题，提示实验中存在较大人为误差。
2） 观察各曲线的Ct值是否在平日的正常位置。
情况1：若出现低拷贝标准品做不出，而各曲线Ct值均后移，则判 断是否为试剂扩增效率下降（如试剂过期或保存条件不合格）。
情况2：出现低拷贝标准品做不出，而高拷贝曲线Ct值均正常，则 提示可能存在低拷贝阳性标准品的降解情况。
3） 每日必做10°标准品，用作以下三方面监控：一是否存在操作误 差，如加样量过少等原因导致104标准品未能检出；二是否存在稀释
后的梯度放置过久，低拷贝标准品降解的情况；三是若高拷贝标准品 岀现Ct值后移，且能排除情况1、2,则判断是否为试剂灵敏度下降。 4. ：逐个分析每条曲线，判断曲线的阴阳性或属 可疑曲线。（可疑标本是指曲线在25个Ct值后出现上涨且平台趋势 不明显或上涨幅度比较低的标木。可疑标木要第二天重做，两次结果 一致则报阳性，否则结