血清谷丙转氨酶测定设计实验.ppt

文档介绍：血清谷丙转氨酶活性的测定
实验题目
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实验目的
掌握谷丙转氨酶活性测定的
原理和方法
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血清谷丙转氨酶作用于由丙氨酸及a一酮戊二酸组成的基质。产生丙酮酸及谷氨酸
血清加基液保温后产生丙酮酸的多少，即反应出谷丙转氨酶活性的大小。
丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在酸性溶液中显黄色，在碱性溶液中成醌型显棕红色。
实验原理
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本实验是在碱性条件下，生成醌类化合物的量反应丙酮酸的量，即反应了谷丙转氨酶的活性。
本法以lml血清与基质液在37℃，
求酶活性单位的方法：
1、标准品对照法：检品与标准丙酮酸液同样处理呈色，进行比色，计算出酶活性单位。
2、标准曲线法：取含待测物的一系列标准溶液，作标准曲线，由标准曲线查得活性单位。
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一、标准品对照法 取试管4支，标号，按下表加试剂：
实验操作
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56℃放置5分钟。

慢慢加入（约1分钟），边加边混匀。
室温放置 30分钟，
测OD值，波长 520nm，用蒸馏水调零点。
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计 算
（ODA-ODB）
（ODs-ODs＇）
=
X （待测样品丙酮酸含量）
50ug/ml
×
ml
X
=
（ODA-ODB）
（ODs-ODs＇）
×
5
SGPT单位=
（ODA-ODB）
（ODs-ODs＇）
×
5


×
=
（ODA-ODB）
（ODs-ODs＇）
×
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二、标准曲线法
配制一系列不同浓度的标准丙酮酸液，并且各加以适量的基质液，
作成标准曲线。具体做法如下表。
。
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各管混匀，放37℃水浴5分钟

慢慢加入（约1分钟），边加边混匀
，混匀
56℃放置5分钟。
室温放置 30分钟
测定OD值, 波长 520nm，用蒸馏水调零点。
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一标准对照法

2、公式计算酶活性单位（要求带入数据，写出结果）
二、标准曲线法

2、绘制标准曲线，（要求规范作图）
3、通过方法一的ODA-ODB，在标准曲线中，查得酶活性单位
实验结果
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