文档介绍：南方医科大学
硕士学位论文
不同来源成体神经干细胞对大鼠脊髓损伤修复作用的实验研究
姓名:蔡颖谦
申请学位级别:硕士
专业:病理学与病理生理学
指导教师:郭琳琅;姜晓丹
20090506
不同来源成体神经干细胞对大鼠脊髓损伤修复作用的实验研究硕士研究生:蔡颖谦指导老师:郭琳琅教授姜晓丹教授摘要研究背景:脊髓损伤侵惺嗌窬低的一种严重创伤,由于损伤后脊髓缺乏自身修复能力,脊髓功能的损害呈不可逆性改变,患者受伤后大多终身丧失劳动力,生活不能自理,造成沉重的家庭和社会负担。壳傲俅仓瘟浦饕0ḿ怪钦弁盐坏母次还潭ā⒔獬顾压迫、改善损伤处脊髓的血液供应、减少各种有害因子或自由基的释放以减少继发性损伤等。但至今仍然没在根本上解决受损后神经元的功能恢复和再生问题,瘟菩Ч廊缓懿焕硐搿近年来,随着神经病理生理及神经发育学领域研究的不断深入,伤性及其再生修复能力的发现,使笊窬偕薷闯晌?赡堋I窬上赴琋移植修复蝗衔J悄壳白钣杏τ们熬暗闹瘟剖侄可在脊髓损伤修复过程的多个方面起作用,包括替代受损细胞如神经元和少突胶质细胞;分泌促进神经再生的神经营养因子,保护神经元,减轻继发损伤:在脊髓损伤空洞区形成桥接引导神经再生;酶解胶质瘢痕,去除细胞碎片,调节免疫反应,修复脊髓中的非神经组织如血管等。尽管目前研究普遍认为,在神经系统损伤修复的治疗中具有广阔的应硕士学位论文之一。,
用前景,但由于来源和数量有限,用于临床治疗仍有诸多限制。如何获得大量的能发挥治疗作用的已成为很多研究人员致力研究的重要课题。的获得包括胚胎来源和成体来源两个途径。胚胎来源是指来源于早期胚胎或胚胎神经组织的,由于其一直备受伦理学的争议,又存在取材困难,移植免疫排斥的风险,故进入临床治疗应用的难度很大。成体来源的是指来源于成年神经组织或成年其他组织干细胞诱导分化而来的。成体神经组织源性可来源于包括从出生到成年神经组织的广泛区域,分布在脑室下区,、纹状体、海马齿状回、脊髓等。成体非神经组织源性来源于骨髓、脂肪、皮肤等组织。珺枪撬柚谐煅S谙赴外存在于骨髓基质中的多能干细胞。目前已证实,谔囟ǖ呐嘌跫可分化成多种细胞,如间充质细胞、成纤维细胞、成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌肉细胞、内皮细胞和神经元及神经胶质细胞等,具有克隆样增殖特性。其具有可向神经细胞方向分化的潜能,成为笙赴浦蔡娲瘟评硐氲闹子细胞来源之一,也是当前移植修复牟呗灾弧最近研究表明,在脂肪组织中也存在一种多能基质细胞,具备向脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞和神经细胞分化的潜能,被称为脂肪源性基质干细胞珹T谔逋饩实碧跫挠盏迹煞只芍肪源性。由于脂肪细胞更容易获得,采集风险相对较小易为病人接受,并可进行自体移植,已逐渐为学术界所关注,成为干细胞移植治疗的一种新种子细胞来源。虽然采用各种不同来源干细胞移植研究都取得了较为肯定的神经修复效果,但对于不同来源干细胞的适用范围、疗效差异等却缺乏足够的关注和较系统的比较实验研究。特别是对于煌丛吹腘浦埠笫欠窬哂邢嗤男综上所述,本课题以应用性研究为目的,选取来源于同一大鼠成体中骨髓、脂肪和脑室下区粜远哉三个部位的组织,体外分离、诱导分化为不中文摘要骨髓基质干细胞复治疗潜力,目前尚未明确。.Ⅱ
第一部分:不同来源成体神经干细胞的获取及相关生物学特性比较同组织来源的,并比较各组体外自我更新的能力;以流式细胞仪等方法检测细胞表型标记物、鉴定虯,并通过细胞周期检测比较两者增殖分化潜能:通过免疫细胞化学检测三组细胞不同阶段晃⒐艿鞍⑸窬褐氏宋嵝缘鞍珿、,等神经营养因子的分泌水平。大鼠应用自由落体损伤模型装置致脊柱撞击伤;对三种不同组织来源的以逋蜒跄蜞奏ず塑,昙呛蠓直鹨浦踩氪笫骃部位;通过婪直冉细髯镹薷碨功能的效果;术后芗觳饧顾空洞率变化;通过免疫组织化学检测虶泶锴榭觯治三组细胞在体内向神经元和胶质细胞分化的情况。通过以上实验,以为阳性对照,试图从体内、体外两方面对比和评价来源于同一成体非神经组织来源撬韬椭的与中枢神经组织来源腘源笫骃的治疗效果,为≡窈鲜实闹肿酉赴幸浦仓瘟铺峁┦笛橐谰荨目的:体外分别诱导分化来源于同一大鼠成体骨髓、脂肪和大脑三种组织的,比较和评价它们在体外自我更新、向神经元或神经胶质细胞分化的能力,通过对比三者体外分泌神经营养因子的能力,进一步评估和对比它们移植修复脊髓损伤的潜能。方法:选取来源于同一大鼠成体骨髓、脂肪和脑室下区粜远哉三个部位的组织,体外分别诱导分化为骨髓源性神经干细胞珺⒅;ǘ考觳馓逋馀,.甦
和伽闹窒赴砻姹昙俏锏谋泶铮徊⒂肳记物的表达,鉴定虯的分化情况,并通过细胞周期检测比较两者的体外增殖潜能;应用免疫细胞化学方法检测巢蛋白、、方法进一步验证免疫