文档介绍：选修３易考知识点背诵
专题１   基因工程
基因工程的概念
基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，，又叫做ＤNA重组技术。
（一）基因工程的基本工具
1。“分子手术刀”-—限制性核酸内切酶(限制酶）
（1)来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。
（2）功能：能够识别双链DNＡ分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。
(3）结果:经限制酶切割产生的DＮ***段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。
２．“分子缝合针”—-DNA连接酶
（１)两种DNＡ连接酶(E·coｌiDNA连接酶和T4－DNA连接酶）的比较:
①相同点：都缝合磷酸二酯键.
②区别:E·ｃoｌiDNA连接酶来源于T４噬菌体,只能将双链DNＡ片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来;而T４DNA连接酶能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效率较低。
(２）与DＮA聚合酶作用的异同: 。 . 。 。.。。。 。 DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二酯键。DＮA连接酶是连接两个DN***段的末端,形成磷酸二酯键。
3。“分子运输车”-—载体
(1）载体具备的条件:①能在受体细胞中复制并稳定保存。
②具有一至多个限制酶切点，供外源DＮ***段插入。
③具有标记基因,供重组DＮA的鉴定和选择.
（2）最常用的载体是.质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子.
（3）其它载体: 噬菌体的衍生物、动植物病毒
（二）基因工程的基本操作程序
第一步：目的基因的获取
1。目的基因是指: 编码蛋白质的结构基因 。
,真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反转录法_和化学合成法_。
３。ＰCＲ技术扩增目的基因
(1)原理：DNＡ双链复制
（２)过程：第一步:加热至９０~９５℃ＤNA解链；第二步：冷却到55～60℃，引物结合到互补DNA链；第三步：加热至70~75℃,热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。
第二步：基因表达载体的构建
:使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。
2．组成：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因
(1）启动子:是一段有特殊结构的DNＡ片段，位于基因的首端,是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出ｍRNA，最终获得所需的蛋白质。
(2)终止子：也是一段有特殊结构的DN***段 ，位于基因的尾端。
（3)标记基因的作用:是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素基因。
第三步：将目的基因导入受体细胞_
:是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。
2。常用的转化方法:
将目的基因导入植物细胞:采用最多的方法是 农杆菌转化法，其次还有 基因枪法和 花粉管通道法等。
将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是 受精卵。
将目的基因导入微生物细胞：原核生物作为受体细胞的原因是 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少 ，最常用的原核细胞是 大肠杆菌 ，其转化方法是：先用 Ca2＋ 处理细胞，使其成为 感受态细胞 ,再将 重组表达载体DNA分子 溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程。
，筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。
第四步：目的基因的检测和表达
1。首先要检测 转基因生物的染色体ＤNA上是否插入了目的基因，方法是采用 DＮA分子杂交技术。
2．其次还要检测 目的基因是否转录出了mRNＡ,方法是采用 用标记的目的基因作探针与 ｍRＮA杂交.
3．最后检测 目的基因是否翻译成蛋白质,方法是从转基因生物中提取 蛋白质，用相应的 抗体进行抗原-抗体杂交。
个体生物学水平的鉴定。如 转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。
（三)基因工程的应用
１．植物基因工程：抗虫、抗病、抗逆转基因植物,利用转基因改良植物的品质。
:提高动物生长速度、改善畜产品品质、用转基因动物生产药物。
：把正常的外源基因导入病人体内，使该基因表达产物发挥作用。
（四)蛋白质工程的概念
蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其