文档介绍：河北医科大学
硕士学位论文
骨髓基质细胞诱导中脑神经干细胞分化的神经元活性的研究
姓名:王彦永
申请学位级别:硕士
专业:人体解剖与组织胚胎学
指导教师:崔慧先;王铭维
20090301
骨髓基质细胞诱导中脑神经干细胞分化的神经元活性的研究因,提示造血干细胞和存在类似的发育和分化机制。定比例的多巴胺能神经元,提示商峁┯盏糆只摘要目的:自多潜能的神经干细胞琋在成年小鼠纹状体分离出来后,人们便开始探索使用治疗神经系统疾病的可行性,发现体外扩增的植入脑内后,可在脑内存活、迁移和分化,更重要的是分化于的神经元能与周围神经元发生整合。因此移植正成为帕金森病等神经系统变性疾病极具有前景的治疗手段。骨髓基质细胞珺且桓龆种细胞共存的多潜能干细胞,受环境因素、激素、细胞因子等的调节,可在体内外分化为内皮细胞、成纤维细胞、巨噬细胞、软骨细胞、肌肉细胞、肝细胞、神经元和神经胶质细胞等。泶锒嘀窒赴砻娣肿雍头置诙嘀窒赴蜃印生长因子以及细胞外基质等,对造血干细胞的分化和发育起着决定性的作用。而调节造血干细胞的细胞因子和生长因子同样也可调节中枢和外周神经系统的发育,包括形态发生、神经元和胶质细胞的分化、神经递质/受体的表达、突起的生长等。更重要的是造血干细胞和可表达很多共同基所以,灿哂械鹘贜⒂头只哪芰Α等发现捎盏夹∈蠛土槌だ喽锱咛ジ上赴化为神经干细胞,后者可分化为较高比例的神经元和一中文摘要
为神经细胞的信号。那么,欠窨芍苯拥鹘贜姆化谔逋饩瑽条件液诱导分化来的这些神经元是否同成熟神经元一样具有神经元的功能狙芯克竦玫男畔将有助于探讨的分化机制和推动的应用,为治疗神经系统疾病奠定了理论基础。方法:分离培养⑿律笫笾心訬笛榉治椋对照组才嘌条件液组—籆组和狢槭墙窬蛑种灿预先包被呐嘌笾校辉蚴墙窬蛑苯又钟正常生长的砻妗T谏窬蛱诤驝组和狢组将液体更换为含的培养液,组换成跫骸C灰阂淮巍蠼蠱一庖哂光染色,复染胞核后,在倒置荧光显微镜下每孔随机选择个不同的视野,使用裳剖粜韵赴数所占的比例。在此基础上应用盏贾心訬分化为神经元,免疫细胞化学染色方法观察分化的神经元是否表达突触体素约坝τ糜ü庀晕数字成像系统检测神经细胞内钙离子的改变,观察分化的神经元的电兴奋性。将三次独立实验的结果一起经统计软件处理,进行显著性分析。结果:分离培养珺细胞的形状接近于成纤维细胞。部分细胞平行排列,使用抗原进行免疫化学染色,发现细胞%为抗原阳性。分离培养培养后,出现个细胞的细胞球。随后细胞开始聚集形成球状悬浮生长,球状的随培养天数增加逐渐增大,形成直径~鱿赴拇笮〔坏鹊腘颉I窬蚰诘南赴中文摘要
性。将其贴壁进行自然分化,发现可以分化为神经元,星形胶质细胞和少突胶质细胞,用—进行诱导,发现较自然对照组比较,在狢椤椋琋只的神经元比例分别为、.%较对照组明显增多。在此基础上利用免疫荧光探针技术,荧光显微数字成像系统对荧光进行采集,荧光图像经过砑蟹治觯扑愠銎骄ü馇慷人媸奔涠变化的曲线。细胞在静状态时荧光比值维持较低水平,分别给予/、谷氨酸/后,荧光强度明显增强,细胞钙内流。在跫河盏贾心訬只的神经元分化后,牙时进行突触素免疫荧光染色,未见明显的突触素表达。至笨杉淮ニ乇泶铮ü庑号相对较弱,观察不到串珠样分布的荧光信号。至保镜下可见明亮荧光信号,呈串珠状排列在神经元的突起上。结论:本研究证实:甆哂性鲋车奶匦裕匀蛔态下可以分化为神经元,星形胶质细胞和少突胶质细胞;梢杂盏糔只纳窬5谋壤龆啵切谓褐氏胞比例减少;瓸—与哂型淖饔茫芄挥盏糔分化的神经元的比例增多,星形胶质细胞比例减少;瓸诱导分化的神经元能够在凸劝彼岬拇碳は麓蚩8通道,钙离子内流,具有电兴奋性的基础;条件液诱导中脑分化而来的神经元能够表达突触体素,具备了在体外形成突触的基础。关键词:骨髓基质细胞;神经干细胞;神经元;突触素;中文摘要
钙通道中文摘要
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