2021年血清总胆红素和结合胆红素测定.ppt

文档介绍：血清总胆红素和结合胆红素测定
改良J-G法测定血清总胆红素和结合胆红素
胆红素氧化酶法测定总胆红素和结合胆红素
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2021/1/15
血清总胆红素和结合胆红素测定
改良J-G法测定血清总胆红素和结合胆红素
【原理】
血清中结合胆红素可直接与重氮试剂反应，产生偶氮胆红素；非结合胆红素须有加速剂咖啡因-苯甲酸钠-醋酸钠作用，其分子内氢键破坏后才能与重氮试剂反应，也产生偶氮胆红素。，最后加入碱性酒石酸钠使紫色偶氮胆红素(吸收峰530nm)转变成蓝色偶氮胆红素，在600nm波长比色，使检测灵敏度提高。
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血清总胆红素和结合胆红素测定
改良J-G法测定血清总胆红素和结合胆红素 【试剂】
1．咖啡因-苯甲酸钠试剂 ，，乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2)，溶于约500ml去离子水中，，搅拌使溶解(加入咖啡因后不能加热溶解)，用去离子水补足至1L,混匀。滤纸过滤，置棕色瓶，室温保存。
2．碱性酒石酸钠溶液 ，酒石酸钠(Na2C4H4O6?2H2O)，用去离子水溶解并补足至1L，混匀。置塑料瓶中，室温保存。
3． ，用去离子水溶解并定容至100ml，混匀，置棕色瓶，冰箱保存，稳定期不少于3个月。，冰箱保存，稳定期不少于2周。
4． 称取对氨基苯磺酸(NH2C6H4SO3H?H2O)，溶于800ml去离子水中，加入浓盐酸15ml，用去离子水补足至1L。
5．重氮试剂 ，混匀即成。
6．。
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血清总胆红素和结合胆红素测定
改良J-G法测定血清总胆红素和结合胆红素 【试剂】
7．胆红素标准液
(1) 目前一般用游非结合胆红素配制标准液，此标准品须用含白蛋白的溶剂配制，常用人混合血清，对此血清的要求如下：
收集无溶血、无黄疽、无脂浊的新鲜血清，混合，必要时可用滤菌器过滤。取过滤后的血清1ml， NaCl溶液24ml，混合。在414nm波长，1cm光径， NaCl溶液调零点，；。
(2) 配制标准液的胆红素须符合下列标准：纯胆红素的氯仿溶液，在25℃条件下，±，波长453nm，摩尔吸光系数应在60 700±1 600范围内；改良J-G法偶氮胆红素的摩尔吸光系数应在74 380±866。
(3) 胆红素标准贮存液(171μmol/L) 准确称取符合要求的胆红素10mg，加入二甲亚砜1ml，用玻璃棒搅拌，使成混悬液。，使胆红素完全溶解后，移入100ml容量瓶中，以稀释用血清洗涤数次并入容量瓶中，，边加边摇(勿用力摇动，以免产生气泡)。最后以稀释用血清定容。配制过程中应尽量避光，贮存容器用黑纸包裹，置4℃冰箱3d内有效，但要求配后尽快作标准曲线。
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血清总胆红素和结合胆红素测定
改良J-G法测定血清总胆红素和结合胆红素
【操作步骤】
混匀后，波长600nm，对照管调零，读取吸光度，在标准曲线上查出相应的胆红素浓度。
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血清总胆红素和结合胆红素测定
改良J-G法测定血清总胆红素和结合胆红素
标准曲线制作
混匀(不可产生气泡)，按总胆红素测定法操作。每一浓度作3个平行管，并分别做标准对照管，用各自的标准对照管调零，读取标准管的吸光度。配制标准液用的溶剂血清中尚有少量胆红素，同样测定后得一吸光度值。每个标准管的吸光度值均应减去此吸光度，然后与相应胆红素浓度绘制标准曲线
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血清总胆红素和结合胆红素测定
改良J-G法测定血清总胆红素和结合胆红素
【参考范围】
血清总胆红素：～19μmol/L(～)；
血清结合胆红素：～(～)。
【临床意义】
1．血清总胆红素测定的意义
(1) 有无黄疸及黄疸程度的鉴别。
(2) 肝细胞损害程度和预后的判断 胆红素浓度明显升高反映