文档介绍：中山大学
博士学位论文
蛋白质组学方法筛选Behcet病患者血清蛋白质标志物
姓名:毛立明
申请学位级别:博士
专业:免疫学
指导教师:杨培增
20090524
蛋白质组学方法筛选病患者血清蛋白质标志物摘要专业:免疫学博士生:毛立明指导教师:杨培增教授害、***溃疡等为特征的多系统自身免疫性疾病,具有发作频繁、受累组织广泛、治疗困难、预后差等特点。病在世界各地均有发生,但多发生于远东、中东和地中海沿岸的一些国家。。病因和发病机制至今仍不清楚,目前有病毒感染学说、细菌感染学说、自身免疫用。以病患者的血清或血液为材料,筛选其中与健康人表达有差异的蛋白质,将有助于对该疾病发病机制的认识,同时也为该病的临床诊断提供新的依据。近些年兴起的蛋白质组学方法为标准蛋白的筛选提供了有力工具。方法:收集疃贐』颊吆例健康人的血清,每组按等体积方式混合为一个血清样本。为尽可能多的检测血清中低丰度的蛋白质,本研究利用亲存在的影响后续试验的赫份,然后用双向电泳方法进行蛋白质的分离,凝胶内的蛋白通过“蓝银”染色法显色,利用图像分析软件,经定量比较筛选出在患者和健康人血清双向电泳图谱中表达存在显著差异的蛋白斑点。差异蛋白斑点经基质辅助激光解吸附串联飞行时间质谱—猅屑ā1狙芯苛硗收集了例活动期病患者、仓蛊贐』颊摺疃赩综合目的:病是一种以反复发作的葡萄膜炎、口腔溃疡、皮肤损该病多发于青壮年,其引起的葡萄膜炎是我国最常见的葡萄膜炎类型之一。它的学说等多种学说,环境因素和遗传因素也在该病的发生中起重要作用本研究利和捕获的方法去除血清混合样本中高丰度的白蛋白和免疫球蛋白,并除去血清中
/,旷畂徒】等征患者和例健康志愿者的血清用虴方法验证蛋白质组学的结果,同时评价差异表达蛋白在病患者血清中表达的相对特异性及其与』颊哂虢】等搜G逅虻缬静钜斓鞍装叩愕幕袢经过预处理后,血清双向电泳图谱中约检测到龅鞍字拾叩恪U庑┑鞍斑点经定量比较共筛选出龅鞍装叩阍贐』颊吆徒】等搜G逯斜泶锎嬖谙著差异,其中龅鞍装叩阍贐』颊哐G迥诒泶锷系鳎个蛋白斑点在患者对在活动期病患者血清中表达上调的和肳椒ń期病患者血清中的表达显著高于活动期酆险骰颊吆徒】等耍ǜ鎏差异较大,表达量平均约高出叮籋赩综合征患者和健康人血清中的综合征患者和健康人,』颊哐G逯锌杉觳獾较灾拿庖反应条带,%的健康人血清中可由于在病患者和健康人血清中表达的个体差异大,本研究用方法对的表达情况作进一步验证,同时评价表达与病活动性的关系,病活动性的关系。结果:血清中表达下调。、血清淀粉样蛋白、维生素岷系鞍和载脂蛋白渲蠨在病患者血清中表达下调。蚐的验证。行验证,同时评价两种蛋白在病患者血清中表达的相对特异性。结果显示,在活动期病、活动期酆险骰颊吆徒】等搜G逯卸加斜泶铮诨疃表达没有显著差异。诨疃贐』颊哐G逯斜泶锵灾哂诨疃赩检测到较弱的免疫反应条带。腅验证。./,畂⒒疃赩综合征患者./,畂的结果与
蛋白质组学和慕峁嘁恢隆结论:本研究进一步证实蛋白质组学技术是筛选疾病血清标志物的有力工具。通过双向电泳联合质谱的方法,我们发现、虯贐』颊血清中表达上调,诨颊哐G逯斜泶锵碌鳌U庑┎钜毂泶锏鞍卓赡懿斡肓关键词:病;血清;;籚综合征病的发生和发展。
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