文档介绍：五、电镜标本制作方法
    电镜标本用于观察组织细胞的超微结构。扫描电镜用于细胞表面的观察，透射电镜用于细胞内部结构的观察。现以透射电镜标本的制作为例作简要介绍：
    (一)取材  标本的新鲜程度要求高于光镜标本，组织块小于lmm3。
    (二)固定  常用的固定液有2．5％戊二醛磷酸缓冲液和1％锇酸。这些液体穿透力较强，能稳定和保存细胞内的结构。固定温度应控制在0～4℃，固定时间1~2小时。
    (三)冲洗  冲洗液由0．2mol／L磷酸缓冲液()与双蒸水等量混合配成。冲洗组织块2次．间隔15分钟。
    (四)脱水  脱水剂多采用浓度递增的酒精和***，从50％   70％    90％酒精    1/2 90％酒精+1/2 90％***混合液   90％***(以上步骤均在0~4℃冰箱中进行)   100％***，间隔10~15分钟。
    (五)包埋  包埋剂为环氧树脂618或812和固化剂十二碳烯基丁二酸酐(简称DD-SA)，加入适量增塑剂苯甲酸二丁酯(简称DDP)。为了使反应速度增快，可加入加速剂2，4，6-三[(二甲氨基)***]苯酚(简称DMP-30)。
    包埋剂配方：    环氧树脂618或812      60％
                    DDSA                  40％
                    DBP                    3％
                    DMP-30                 1％
上述试剂依次加入，边加边搅拌，全部加完后再充分搅拌10～15分钟，静置于35~40℃温箱内排出气泡。包埋前组织块必须浸透，入无水***加等体积包埋剂室温3小时，纯包埋剂37℃ 2小时。包埋时先将纯包埋剂倒入胶囊或含硅胶的包埋槽内，置入组织块。包埋后在60C温箱中烘2～3天后硬化成块，即可剥去胶囊或包埋槽。
    (六)将组织块修成塔形，×，用超薄切片机切成50mm厚的超薄切片，再置于铜网上。
    (七)染色  常用的染液有1~2％醋酸铀和枸橼酸铅。醋酸铀染色是在组织块进行脱水过程中进行的，而枸橼酸铅染色则多用于片染。最后，将载有切片的铜网置于透射电镜内观察和摄影。
由于电镜电子束穿透能力的限制，，这种薄片称为超薄切片。常用的超薄切片厚度是50-70nm。
在透射电镜的样品制备方法中，超薄切片技术是最基本、最常用的制备技术。超薄切片的制作过程基本上和石蜡切片相似，需要经过取材、固定、脱水、浸透、包埋聚合、切片及染色等步骤。
一取材的基本要求
组织从生物活体取下以后，如果不立即进行适当处理，会由于细胞内部各种酶的作用，出现细胞自溶现象。此外，还可能由于污染，微生物在组织内繁殖使细胞的微细结构遭受破坏。因此，为了使细胞结构尽可能保持生前状态，必须做到快、小、准、冷：
(1)．动作迅速，组织从活体取下后应在最短时间内 (争取在1分钟内) %戊二醛固定液。
(2)．所取组织的体积要小，一般不超过1mm×1mm×1mm。也可将组织修成1mm×1mm×2mm大小长条形。因为固定剂的渗透能力