文档介绍：EphA2在大肠腺癌中的表达
陈壬寅李珊珊
郑州大学第一附属医院病理科
郑州大学基础医学院病理学教研室
河南省肿瘤病理重点实验室
第一部分
大肠腺癌中EphA2表达及其与临床病理学因素、DNA倍体、细胞周期关系的研究
EphA2基因的介绍
EphA2是Lindberg于1990年用简并引物从人角化细胞cDNA文库中筛选得到的一个Eph(Erythropoitin-produceing hepato-cellular,Eph) 亚家族成员。
,有17个外显子。
Eph受体家族是已知最大的酪氨酸蛋白激酶受体(receptor tyrosine kinase, RTK)家族最大的家庭。
Eph家族受体激酶和他们EFN配体介导的细胞信号传
导参与神经系统的基本发生过程、神经系统的信号传
递,在细胞的分化、发育、增殖,组织和器官的形成、血管生成、细胞与细胞之间的粘附及肿瘤的发生和肿瘤的新生血管的形成等过程中发挥重要的和必不可少的作用。
EphA2与肿瘤的关系
EphA2广泛高表达于不同的肿瘤组织和细胞系,如:乳腺癌、恶性黑色素瘤、前列腺癌和食管癌,肾细胞癌等,目前认为EphA2参与肿瘤的发生和发展,是功能强大的癌基因。
EphA2的高表达能诱导非转化乳腺和前列腺上皮细胞在体内、外的恶性转化,并促进其侵袭转移。
应用EphA2蛋白的抗体靶向抑制试验,下调EphA2蛋白表达的同时,也抑制了肿瘤细胞的生长,进而降低肿瘤的恶性程度。
154例大肠腺癌组织和相应正常大肠粘膜组织均来自郑州大学第一、二附属医院和河南省肿瘤医院2001年1月~2004年12月手术切除标本的存档蜡块(其中66例为手术切除新鲜标本和蜡块和88例存档蜡块)
1份置4%多聚甲醛中固定存放
另2份置-82℃中存放
石蜡包埋、切片、 HE
染色
石蜡包埋、切片,进行免疫组化
提取总
mRNA、
进行RT-
PCR
实验标本
FCM检
侧DNA
倍体、细
胞周期
细胞增
殖率
临床病理资料
154例(88例存档石蜡包埋标本和66例手术切除新鲜大肠腺癌标本)大肠腺癌患者,术前均未接受化疗、放疗及其他治疗。其中男性 78例,女性 76例,年龄在 23-85岁之间,平均年龄为 。
66例新鲜手术切除标本均为大肠腺癌:
分化程度:高分化腺癌30例,中分化腺癌23 例,低分化腺癌13例。
浸润深度:粘膜层10例,粘膜下层0例,肌层14例,浆膜层37例,外周组织5例。
转移:有淋巴结转移者16例,无淋巴结转移者50例;有血道转移者1例,无血道转移者65例;无种植性转移。
88例存档蜡块全部为腺癌:
分化程度:高分化腺癌21例,中分化腺癌18例,低分化29例和未分化20例;
浸润深度:粘膜层62例,粘膜下层1例,肌层17例、浆膜层5例,外周组织3例;
转移:有淋巴结转移者14例,无淋巴结转移者74例;有血道转移者11例,无血道转移者77例;有种植性转移者10例,无种植性转移者78例。
技术路线
免疫组化(SP法)
FCM
RT-PCR技术
检测154例大肠腺癌组织和相应正常食管组织中EphA2蛋白表达
检测66例大肠腺癌手术切除新鲜组织和相应正常大肠粘膜手术切除新鲜组织中DNA倍体、细胞周期、细胞增殖率
探讨EphA2表达与大肠腺癌病理临床因素、DNA倍体、细胞周期的关系
检测66例大肠腺癌手术切除新鲜组织和相应正常大肠粘膜手术切除新鲜组织中EphA2mRNA表达
一. 免疫组化
步骤(略)
对照组设计:以已知EphA2阳性食管鳞癌和正常食管粘膜腺体组织切片作为阳性对照,用正常兔IgG代替一抗作为阴性对照,用PBS代替一抗作为空白对照。
免疫组化结果判定及定量分析:EPhA2免疫组化阳性表达位于细胞胞浆,呈棕黄色。定量分析采用高清晰图像处理系统,随机取10个高倍视野进行图像分析,对免疫组化切片检测EphA2阳性细胞数,依据阳性细胞所占肿瘤细胞面积的百分比和染色强度判断结果。
实验方法