文档介绍：日期：2010-07-17
高效液相色谱仪操作方法
Waters e2695 型
waterse2695高效液相色谱
什么是高效液相色谱法
High Performance Liquid Chromatography
高效液相色谱法，简称：HPLC
是一种基于仪器方法的高效能分离手段：
高性能的色谱柱，高精度、耐高压的输液泵以及高灵敏度的检测器……
广泛应用于各个领域：
医药 / 环保 / 石化 / 生命科学 / 食品及农业……
在技术，理论及应用上仍处于发展阶段
waterse2695高效液相色谱
定量分析主要基于与标准品的比较
是其最大应用领域
定性分析；不是色谱的强项
基于样品的保留时间比较
借助于和其联用的紫外、质谱或其他检测器
对定量及定性分析的要求
灵敏度、精度及准确度的要求
样品量的要求；复杂样品的分析能力
容易使用
什么是高效液相色谱法
waterse2695高效液相色谱
高效液相色谱如何工作
一个储液瓶装有溶剂[称为流动相，因为溶剂是流动的]。
一个高压泵[溶剂传输系统或称溶剂管理器]用来产生和计量流动相的流速，一般是毫升/分钟。
一个进样器[样品管理器或自动进样器]可以将样品导入[注射]连续的流动相，并由流动相携带样品进入高效液相色谱柱。
色谱柱装有能获得分离效果的填料。这种填料称为固定相因为它被柱硬件包围住。
检测器用来查看化合物流出色谱柱时被分开的谱带[大多数化合物没有颜色，所以人眼观察不到]。
流动相流出检测器可被送至废液瓶，或按需被收集。
当流动相含有一个分开的化合物谱带，高效液相色谱可以收集含有纯化的化合物的该洗脱组分，用于进一步分析。
注意高压管路和附件用来连接泵、进样器、色谱柱和检测器单元，形成流动相、样品和化合物分离谱带的通路。
waterse2695高效液相色谱
检测器连接计算机数据站，高效液相色谱系统单元先记录电信号，再将电信号转换为色谱图，在显示屏上展现出来。
定性和定量样品内溶物浓度。
由于样品中化合物性质差异很大，几种类型的检测器被开发出来。
如果一个化合物能吸收紫外光，可使用紫外吸收检测器。
如果这个化合物发荧光，可使用荧光检测器。
如果该化合物没有上述性质之一，可使用更广泛的检测器，如蒸发光散射检测器[ELSD]。
最强大的方式是顺序使用多个检测器。例如，紫外和/或蒸发光检测器可和质谱仪[MS]联用来分析色谱分离的组分。这样，从一次进样，可得到分析物的更多综合的信息。将质谱与高效液相色谱系统耦合称之为液质联用.
高效液相色谱如何工作
waterse2695高效液相色谱
液相色谱的基本流程图
流动相
泵
色谱柱
检测器
泵输液
分离
检测
记录
A
E
G
B
C
D
F
进样阀
进样
waterse2695高效液相色谱
液相色谱的各部分示意图
液相色谱实验所需的基本参数--亦称色谱条件
流动相：种类及配比，等度或梯度
固定相：色谱柱类型及内径、长短
流动相输送系统参数：流速
检测器参数：紫外检测波长，灵敏度等
温度控制
进样量
waterse2695高效液相色谱
仪器组成及开机
溶剂管理系统的准备
样品管理系统的准备
运行样品
数据采集
报告打印
关机
Waters e2695 型高效液相色谱仪操作方法
waterse2695高效液相色谱
Waters e2695 型高效液相色谱仪操作方法
仪器组成及开机 1 仪器组成
Waters e2695 分离单元
2498型紫外检测器
色谱管理工作站
打印机
四元梯度洗脱的溶剂输送系统
四通道在线真空脱气机
可容纳 120 个样品瓶的自动进样系统
柱温箱
内置的柱塞杆密封垫清洗系统
溶剂瓶托盘
液晶显示器
键盘用户界面及软盘驱动器
waterse2695高效液相色谱
2 开机
打开电源至on位置，开机依次接通 2695 分离单元、检测器、计算机和打印机的电源。接通后，约 20s 仪器开始自检，约 1min 后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化。
waterse2695高效液相色谱