文档介绍：实验九培养基的制作及病原物的分离培养
一、实验目的
病原物的生长发育都需要一定的营养,在人工培养微生物时,为其生长发育提供所需营养的基质,称为培养基。
病原菌通常是与其它微生物混生在一起的,从病组织中将病原菌单独分选出来,称为分离。
分离出的病原物在人工培养基上生长,称为培养。
培养基配好之后,必须经过灭菌才能用于微生物的分离培养。
本实验的目的是学习植物病理实验室中常用的培养基的制作方法、高压灭菌锅的使用方法、学习植物病原物分离培养的原理和常用方法。
二、内容、材料和方法
(一) 培养基的配制
培养基按组成成分及对这些成分了解的程度分为:
1. 天然培养基:动植物的组织和它们的煎汁、厩肥、土壤和土壤浸出液等配成的培养基,称为天然培养基,其成分复杂,几乎无法完全了解。
2. 半组合培养基:由成分末知的天然物质和成分已知的物质配成,如马铃薯蔗糖培养液中的蔗糖是已知成分,而马铃薯是成分末知的天然物质。
3. 组合培养基:是成分和浓度完全已知的培养基,是由成分已知的化学药品配成。
从物理性质上又可以分为液体培养基和固体培养基:
液体培养基中加入适当的凝固剂,就成为固体培养基,凝固剂有琼脂、明胶和硅胶,最常用的是琼脂。
培养基的种类不同,配制方法也有差异,限于时间,本次实验仅配制马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA),它属于半组合固体培养基。
成分:马铃薯 200g
葡萄糖 20g
琼脂 20g
水 1000ml
方法:将马铃薯洗净去皮切块,加热煮沸30分钟,用双层纱布滤去薯块,加入琼脂,加热熔化,再加入葡萄糖,完全熔化后,趋热用纱布过滤分装。
不同微生物对酸度的适应范围不同,真菌的适应范围广,并且偏好微酸性。由于实验室常用的培养基通常是微酸性的,所以在培养真菌时往往不需要调节酸度;但培养细菌时要调节到中性;培养放线菌时要调节到微碱性。
(二) 培养基的灭菌
灭菌:是指用物理或化学的方法完全杀死器物表面及其内部的所有微生物。
消毒:是指消灭器物表面或植物组织表面的某些微生物,而不是消灭所有的微生物。
植物病理实验室学常用的灭菌方法有干热灭菌和湿热灭菌两种,一般培养皿、吸管等玻璃仪器用干热灭菌法进行灭菌;而培养基和实验用的土壤,则用高压蒸汽灭菌法进行湿热灭菌,具体灭菌方法和步骤如下: