文档介绍：二环境条件
在植物组织培养中温度、光照、湿度等各种环境条件,培养基组成、pH值、渗透压等各种化学环境条件都会影响组织培养育苗的生长和发育。
温度(temperature)
因为温度是植物组织培养中的重要因素,所以植物组织培养在最适宜的温度下生长分化才能表现良好,大多数植物组织培养都是在23~27℃之间进行,一般采用25± 2℃。低于15℃℃时培养,植物组织会表现生长停止,高于35℃时对植物生长不利。但是,不同植物培养的适温不同,百合的最适温度是20℃、月季足25-27℃、番茄是28℃。温度不仅影响植物组织培养育苗的生长速度,也影响其分化增殖以及器官建成等发育进程。如烟草芽的形成以28℃为最好,在120℃以下,33℃以上形成率皆最低。
不同培养目标采用的培养温度也不同,百合鳞片在30℃以下再生的小鳞茎的发叶速度和百分率都比在25℃以下的高。桃胚在2—5℃条件进行一定时间的低温处理,有利于提高胚培养成活率。用35℃处理草莓的茎尖分生组织3—5d,可得到无病毒苗。
光照(light)
组织培养中光照也是重要的条件之一,主要表现在光强、光质、以及光照时间方面
(light intensity)
光照强度对培养细胞的增殖和器官的分化有重要影响,从目前的研究情况看,光照强度对外植体及细胞的最初分裂有明显的影响。一般来说,光照强度较强,幼苗生长的粗壮,而光照强度较弱幼苗容易徒长。
(light wave)
光质对愈伤组织诱导,培养组织的增殖以及器官的分化都有明显的影响。如百合珠芽在红光下培养,8周后,分化出愈伤组织。但在蓝光下培养,几周后才出现愈伤组织,而唐菖蒲子球块接种15d后,在蓝光下培养首先出现芽,形成的幼苗生长旺盛,而白光下幼苗纤细。
(light period)
试管苗培养时要选用一定的光暗周期来进行组织培养,最常用的周期是16h的光照,8h的黑暗。研究表明,对短日照敏感的品种的器官组织,在短日照下易分化,而在长日照下产生愈伤组织,有时需要暗培养,尤其是一些植物的愈伤组织在暗下比在光下更好。如红花、乌饭树的愈伤组织。
湿度(humidity)
湿度的影响包括培养容器保持和环境的湿度条件,容器内主要受培养基水分含量和封口材料的影响。前者又受琼脂含量的影响。在冬季应适当减少琼脂用量,否则,将使培养基干硬,以致不利于外植体接触或插进培养基,导致生长发育受阻。封口材料直接影响容器内湿度情况,但封闭性较高的封口材料易引起透气性受阻,也会导致植物生长发育受影响。
环境的相对湿度可以影响培养基的水分蒸发,一般要求70%—80%的相对湿度,常用加湿器或经常洒水的方法来调节湿度。湿度过低会使培养基丧失大量水分,导致培养基各种成分浓度的改变和渗透压的升高,进而影响组织培养的正常进行。湿度过高时,易引起棉塞长霉,造成污染。
渗透压(rating pressure)
培养基中由于有添加的盐类、蔗糖等化合物,因此,而影响到渗透压的变化。通常1—2个大气压对植物生长有促进作用,2个大气压以上就对植物生长有阻碍作用,而5—6个大气压植物生长就会完全停止,6个大气压植物细胞就不能生存。
pH值(pH value)
不同的植物对培养基最适pH值的要求也是不同的(表2—1),大多在5、,,这基本能适应大多植物培养的需要。
pH值适度因材料而异,也因培养基的组成而不同。以硝态氮作氮源和以铵态氮作氮源就不一样,后者较高一些。,培养基全变硬;低于5时,琼脂不能很好地凝固。因为高温灭菌会降低pH值(—)—。。,。调节时一定要充分搅拌均匀。
种类
最适pH值
种类
最适pH值
杜鹃

月季

越桔

胡萝卜、石刁柏

蚕豆

桃

番茄

不同植物的最适pH值
氧气(oxygen)
氧气是组织培养中必需的因素,瓶盖封闭时要考虑通气问题,可用附有滤气膜的封口材料。通气最好的是棉塞封闭瓶口,但棉塞易使培养基干燥,夏季易引起污染。固体培养基可加进活性炭来增加通气度,以利于发根。培养室要经常换气,改善室内的通气状况。液体振荡培养时,要考虑振荡的次数、振幅等,同时要考虑容器的类型、培养基等
第二节培养基的制备
一、母液(stock solution)的配制和保存
在植物组织培养工作中,配制培养基是日常必备的工作。为简便起见,通常先配制一系列母液,即贮备液。所谓母液是欲配制液的浓缩液,这样不但可