文档介绍：大鼠磷酸化蛋白激酶试剂盒说明书大鼠磷酸化蛋白激酶 C(P-PKC) 酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 96T 3 IU/L -100 IU/L 使用目的: 本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中磷酸化蛋白激酶 C(P-PKC) 含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠磷酸化蛋白激酶 C(P-PKC) 水平。用纯化的大鼠磷酸化蛋白激酶 C(P-PKC) 抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入磷酸化蛋白激酶 C(P-PKC) ,再与 HRP 标记的磷酸化蛋白激酶 C(P-PKC) 抗体结合,形成抗体- 抗原- 酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色, 并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的磷酸化蛋白激酶 C(P-PKC) 呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度( OD值), 通过标准曲线计算样品中大鼠磷酸化蛋白激酶 C(P-PKC) 浓度。试剂盒组成 1 30 倍浓缩洗涤液 20ml ×;1瓶7 终止液 6ml ×;1瓶2酶标试剂 6ml ×;1瓶8 标准品( 200IU/L ) ×;1瓶3 酶标包被板 12孔×;8条9 标准品稀释液 ×;1瓶4 样品稀释液 6ml ×;1瓶 10 说明书 1份5 显色剂 A液 6ml ×;1瓶 11 封板膜 2张6 显色剂 B液 6ml ×; 1/瓶 12 密封袋 1 个标本要求 1 .标本采集后尽早进行提取, 提取按相关文献进行, 提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20 ℃保存,但应避免反复冻融 2 .不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的( HRP ) 活性。操作步骤 1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支, 用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 100 IU/L 5 号标准品 150 μl 的原倍标准品加入 150 μl 标准品稀释液 50 IU/L 4 号标准品 150 μl的5 号标准品加入 150 μl 标准品稀释液 25 IU/L 3 号标准品 150 μl的4 号标准品加入 150 μl 标准品稀释液 IU/L 2 号标准品 150 μl的3 号标准品加入 150 μl 标准品稀释液 IU/L 1号标准品 150 μl的2 号标准品加入 150 μl 标准品稀释液 2. 加样: 分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl, 待测样品孔中先加样品稀释液 40μl ,然后再加待测样品 10μl (样品最终稀释度为 5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部, 尽量不触及孔壁, 轻轻晃动混匀。 3. 温育: 用封板膜封板后置 37℃温育 30分钟。 4. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用 :小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去, 如此重复 5次, 拍干。 6. 加酶: 每孔加入酶标试剂 50μl, 空白孔除外。 7. 温育: 操作同 3。 8. 洗涤: 操作同 5。 9. 显色: 每孔先加入显色剂 A50 μl ,再加入显色剂 B