文档介绍:宝宁丸对免疫功能影响论文
1材料与方法
醋制鳖甲、银柴胡、生黄芪、生山药各10g,炒莱菔子、防风、炒枳实各4g,炒白术5g,炒麦芽、炒神曲、鸡内金各6g,由我校二附院中药饮片厂制剂教学科研基地按比例制成散剂。实验前浸泡24h(温度为0~4℃),过滤去渣取上清液,配成浓度为50g/L的溶液备用。
,由南阳医学高等专科学校实验动物中心提供,小鼠体质量18~22g,雄性,饲养于清洁级实验室内。
,按体质量配对后随机分为两组,宝宁丸组(B组)和对照组(C组)各16只,B组以50g/L的宝宁丸溶液灌胃,2次/d,C组以生理盐水灌胃,2次/d。
·ml-1牛血清白蛋白作为抗原在1,4,8周对小鼠腹腔注射,,,。
,用免疫双向扩散法测小鼠血清抗体效价。在1∶16以上时即达到要求,第9周时集体处死。处死前将小鼠禁食24h,以免血脂过高。用断头法处死小鼠,每只小鼠分别取血置于1ml离心管中。常温静置1h,4℃过夜,使血块收缩,将血块自容器壁分离,将血清全部倾入离心管。4℃下2500r/min离心30min,取上清部分与前面血清混合,3000r/min离心5min取上清液,即为所需血清。
,。,,,依此类推,稀释到第9管,,第10管不加小鼠血清,。第1到第9管的稀释倍数分别为2,4,8,16,32,64,128,256,512倍。每管中再加入100μg·ml-。混匀后室温放置60min,以出现明显凝集的试管的稀释倍数为血清抗体效价。
[2]于无菌操作下,自鸡翼下静脉采血,置Alsever’’’’s溶液中,高压蒸气灭菌,4℃冰箱保存。临用时,用生理盐水洗涤3次,离心弃去上清液,用生理盐水配成20ml/L(V/V)。
,按体质量配对后随机分为宝宁丸组(B组)、卡介苗组(K组)和生理盐水组(C组),每组各10只,分笼饲养。按表1给药。表1小鼠腹腔巨噬细胞功能测定动物分组及给药情况(略)
4周后,每鼠腹腔注射20ml/L(v/v)。间隔30min,颈椎脱臼处死动物,将其仰位固定于鼠板上,正中剪开腹壁皮肤,,转动鼠板,,平均分滴于2片载玻片上,移置(37±1)℃孵箱温育30min,于生理盐水中漂洗,以除去未贴片细胞。晾干,以1∶1丙酮甲醇溶液固定,40ml/L(V/V)Gimsa-磷酸缓冲液染色3min,再用蒸馏水漂洗,凉干。镜检,计数吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数和被吞噬的鸡红细胞总数,计算吞噬百分率和吞噬指数。计算公式为:吞噬百分率(