文档介绍：PCR扩增产物的电泳分析
琼脂糖凝胶电泳
常用于临床检测（定性）
聚丙烯酰***凝胶电泳
分离效果比琼脂糖好，条带比较集中
可用于科研及检测分析
琼脂糖凝胶电泳
琼脂糖凝胶电泳是一种非常简便、快速、最常用的分离纯化和鉴定核酸的方法
琼脂糖是从海藻中提取的一种线状高聚物
根据琼溶解温度，把琼脂糖分为一般琼脂糖和低熔点琼脂糖
低熔点琼脂糖熔点为62～65℃，溶解后在37℃下维持液体状态约数小时，主要用于DN***段的回收，质粒与外源性DNA的快速连接等
凝胶浓度选择
琼脂糖浓度(%)
线型DNA分子的分离范围(Kb)

5～60

1～20

～10

～7

～6

～3

～2
琼脂糖凝胶的浓度与DNA分离范围
电泳缓冲液
常用三种缓冲液
Tris-硼酸（TBE）
Tris-乙酸（TAE）
Tris-磷酸（TPE）
TBE与TPE：缓冲容量高，DNA分离效果好，但TPE在DN***段回收时含磷酸盐浓度高，容易使DNA沉淀
TAE：缓冲容量低，但价格较便宜，因而推荐选用TAE。缓冲液中的 EDTA 可螯合二价阳离子，从而抑制DNA酶的活性，防止PCR扩增产物降解
10×TBE缓冲液的配制
配方
Tris 108克
EDTA
硼酸 55克
H2O至 1000ml
～
×TBE（20倍稀释）
核酸电泳的指示剂
指示剂：
溴酚兰
二甲苯青
溴酚兰：在碱性液体中呈紫兰色
电泳中，溴酚兰的迁移率与双链线性DN***段
琼脂糖凝胶浓度
%
1%
%
2%
迁移率
1Kb

核酸电泳的指示剂
二甲苯青：水溶液呈兰色，
电泳时，其迁移速率与双链线性DNA大致相当
琼脂糖凝胶浓度
1%
%
迁移率
2Kb

载样缓冲液
指示剂一般与蔗糖、甘油或聚蔗糖400组成载样缓冲液
作用：
①增加样品密度，使其比重增加，以确保DNA均匀沉入加样孔内
②在电泳中形成肉眼可见的指示带，可预测核酸电泳的速度和位置
③使样品呈色，使加样操作更方便
核酸电泳的染色剂
最常用的染色剂
溴化乙锭
银染色
核酸电泳的染色剂
溴化乙锭（ethidium bromide，EB）
是一种荧光染料，EB分子可嵌入核酸双链的碱基对之间，在紫外线激发下，发出红色荧光
，有时亦可在电泳后，将凝胶浸入该浓度的溶液中染色10～15min
琼脂糖凝胶EB染色，肉眼可见核酸电泳带，其DNA量一般>5ng
溴化乙锭太多，凝胶染色过深，核酸电泳带看不清时，可将凝胶放入蒸馏水浸泡30min后再观察