文档介绍：碱性磷酸酶的提取及其 比活性测定
带教: 张学礼、戴薇薇
龚张斌、黎志萍
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实验二 碱性磷酸酶的提取及其比活性测定
材料选择
细胞的破碎
分离纯化
鉴定
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实验二 碱性磷酸酶的提取及其比活性测定
碱性磷酸酶 (ALP , AKP)
Alkaline phosphatase
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实验二 碱性磷酸酶的提取及其比活性测定
一、实验目的
1、 掌握以有机溶剂分离技术提取蛋白质及酶的原理和方法；
2、掌握酶蛋白纯化过程中的活性、比活性、得率及纯化倍数的概念及计算；
3、了解AKP的临床意义及纯化蛋白质的一般方法。
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实验二 碱性磷酸酶的提取及其比活性测定
二、实验原理
1、 AKP概述
① 催化有机单磷酸酯水解，并有转移磷酸基的作用
②最适pH：～
③ 特点：特异性低
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实验二 碱性磷酸酶的提取及其比活性测定
④体内位置：细胞膜表面
-肾小管的筛状缘
-肠粘膜的微绒毛
-胆小管的细胞膜缘
-肝窦状腺表面
-胎盘合体细胞滋养层细胞外表面
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实验二 碱性磷酸酶的提取及其比活性测定
⑤正常血清：
ALP主要来自肝（或胆管）和骨骼，约各占总活性的一半。
⑥临床意义：血清ALP活力增高常见于
-肝胆疾病（胆道阻塞等）
-骨骼疾病（佝偻病等）
-甲状腺功能亢进
-妊娠和生长期儿童
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实验二 碱性磷酸酶的提取及其比活性测定
2、AKP的分离、提取、及纯化
整个制备过程可分为 5 个阶段：
①材料的选择和预处理，
②细胞的破碎，
③提取，
④纯化（包括盐析、有机溶剂提取、层析、电泳等），
⑤浓缩、干燥及保存。
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实验二 碱性磷酸酶的提取及其比活性测定
① 取材
取酶含量丰富、容易提取、新鲜的组织
本次实验：肝脏
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实验二 碱性磷酸酶的提取及其比活性测定
② 生物组织与细胞的破碎
机械破碎法 ：高速组织捣碎机、匀浆器、研钵
渗透破碎法 ：低渗条件使细胞溶胀而破碎
反复冻融法 ：
超声波法：超声波震荡器使细胞膜上所受张力不均而使细胞破碎
酶法 ：如用溶菌酶破坏微生物细胞
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