文档介绍：兰州大学博士论文拟南芥菜举冈Arabidillo.,结构和功能的初步研究中文摘要本文的主要内容是对拟南芥基因Arabidillo-1进行的初步研究。我们首先从已公布的拟南芥基因组数据库中获得了Arabidillo-1的相关信息,并对该基因进行了生物信息学相关的初步分析。该基因长4044bp,mRNA全长2793bp,表达产物包含930个氨基酸,该蛋白在N端包含一个F-box结构域,另外该蛋白还含有多个Arm结构域。然后本文从拟南芥中将Arabidillo一』克隆了出来,并通过测序确认了该基因的全序列,同时将该基因的eDNA克隆到T一载体中,作为后面的实验中Arabidillo一-的模板。本文将ARABIDILLO--1的eDNA与荧光蛋白YFP的基因分别插入植物双元表达载体pKYL71中,然后分别利用花序法和叶盘法转化南芥和烟草。通过对转基因植物材料的观察,发现ARABIDILLO-1蛋白定位在细胞核上。然后我们又克隆了 Arabidillo一1的上游启动子,并将其插入植物表达载体pBll21中与6US基因相连,花序法转化拟南芥后,通过GUS染色初步发现该蛋白在拟南芥的根,顶端分生组织和子叶中有表达。此外本文还用RT-PCR的方法进_步对ARABIDILLO-I 的组织定位进行了研究,试验表明该蛋白在拟南芥的根,茎,叶,花中都有表达, 而且在根和花中表达最多。同时我们购买了针对该基因T-DNA插入失活的拟南芥突变体,通过对该突变体的初步研究,发现该蛋白在GA3处理下对拟南芥侧根的发育有影响,而KT,6一BA,IAA,2,4-D处理对突变体和野生型的影响都没有明显区别。此外,我们还分别用高盐(高浓度NaCl)及Ca2+阻断刺异博定(Verapami l)处理突变体和野生型拟南芥,也没有发现突变体与野生型的表型区别。本文将ARABIDILLO-I的cDNA的全长插入到含有叻(binding domain)结构域酵母双杂载体pGBKT7中,与己构建到含有AD(active domain)结构域的酵母双杂载体pGADT7中的ASK家族共十七个成员分别进行酵母双杂交,结果显示 ARABIDILLO-I与ASK2和ASKll酵母双杂结果呈阳性,表明它们之『白J存在蛋白间相互作用。在此基础上,我们又将ARABIDILLO-1分为不同的九个片段,分别与 n 兰I、11人学博L论义似州卯采特冈AroDlCllllO-,-y卅r96 ASK2和ASKll进行杂交,结果发现ASK2和含有F-box结构域的所有ARABIDILLO-1 的片段都存在相互作用,而ASKll则只与仅缺少C端的ARABIDILLO--1的大片断(包含卜750个氨基酸)存在相互作用,而与其余片断都不存在相互作用。除此之外,本文还发现ARABIDILLO-1的同源物ARABIDILLo_2只与ASK2存在相互作用,而与包括ASKll在内的其它16个ASK家族成员都不存在相互作用。 ARABIDILLO-I不能形成二聚体,而且ARABIDILLO一1和ARABIDILLO-2不能形成异源二聚体。由实验结果我们推测,ARABIDILLO-I对侧根发育的影响是通过将某些抑制侧根发育的蛋白因子连接到泛素连接酶E3上,进而促使这些蛋白因子的泛素化降解而实现的。由于ARABIDILLO—l定为在细胞核内,所以我们推测这种影响也可能是ARABIDILLO-I在细胞核内通过参与对某些基因表达的调控而实现的。但是我们还不明白为什么ARABIDILLO--1对侧根发育的影响需要GA的参与。关键词:ARASIDILLO-I,侧根,YFP,GUS,酵母双杂交,ARABIDILLO-2 n 兰州大学博t论文拟南芥菜基嘲Arabidillo-I结构和功能的初步研究 ABSTRACT Thisstudy focuses on theArabidillo—J which is allArabidopsis firstget some information about from many databanks ofArabidopsis,and analyzed itusingmany DNA ofArabidillo—J has4044bp and themRNA contains 2793 bp,and itexpresses aprotein which has930 amino has an F-box domain intheN-terminal andthere are 9Ann domains inthe middle ofthisprotein