文档介绍：从国际谈发展
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DNA测序技术
第一代：双脱氧末端终止法
化学降解法
第二代：DNA序列分析的自动化
第三代：新一代DNA测序技术
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第一代
70年代末，Sanger发明双脱氧核苷酸末端终止法，到现在仍为绝大多数实验室常用的DNA序列分析方法。
同期，WalterGilbert发明化学降解法。
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双脱氧末端终止法原理
2’端羟基被氢原子取代形成
dNTP
3’端羟基再次被氢原子取代形成
ddNTP
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无论体内还是体外条件下的DNA合成反应，DNA聚合酶都是以单链DNA为模板，根据碱基互补配对原则，将适当的dNTP底物连接到事先已经与DNA单链模板结合的寡核苷酸引物的3’羟基末端，形成3’,5’-磷酸二酯键，同时脱去一个焦磷酸（PPi）分子；而新连接到引物上的dNTP底物又提供一个新的3’羟基末端，与下一个dNTP底物连接，以形成下一个3’,5’-磷酸二酯键，以此类推，从而使引物延伸下去最终合成一条与单链模板互补的完整新链
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化学降解法
单侧末端标记的DN***段在5组相互独立的化学反应中分别得到部分降解，其中每一组反应特异地针对某一种或某一类被修饰碱基，因此形成5组带有放射性标记的长短不一的DNA混合物。它们的长度取决于该组反应所针对的碱基在原有DN***段的位置。
通过聚丙烯酰***凝胶电泳分别分离这5组DNA混合物，再通过放射自显影来检测末端标记DNA链的电泳区带位置。
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第二代
双脱氧末端终止法操作简便、结果清晰可靠，一次能确定300-500个核苷酸序列，已成为最常用的DNA测序方法。在第二代DNA序列分析的自动化中仍沿用该原理。
化学降解法操作繁杂，所用的化学试剂多为有毒物质，且无法进行自动化分析，故在DNA序列分析中很少人用。
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第二代
80年代中期，出现自动测序仪（应用双脱氧终止法原理）、荧光代替同位素，计算机图象识别
90年代中期，测序仪重大改进、集束化的毛细管电泳代替凝胶电泳
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DNA序列分析的自动化原理
利用双脱氧末端终止法的原理，用四种不同的荧光化合物分别标记4种反应产物，把4种反应物混合在一起进行电泳，从而大大提高点用分析的效率，实现了DNA测序的高度自动化。
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ABI型全自动DNA测序仪：其特点采用专利的4种荧光染料分别标记终止物ddNTP或引物，经Sanger测序反应后，反应产物3’端（标记终止物法）或5’端（标记引物法）带有不同的荧光标记》一个样品的4个测序反应产物可在同一泳道内电泳，从而降低测序泳道间迁移率差异对精确性的影响。通过电泳将各个荧光标记片段分开，同时激光检测器同步扫描，激发的荧光经光栅分光，以区分代表不同碱基信息的不同颜色的荧光，并在CCD摄影机上同步成像。电脑可在电泳过程中对仪器运行情况进行同步检测。结果能以电泳图谱、荧光吸收峰图或碱基排列顺序等多种方式输出。
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