文档介绍：华中科技大学
博士学位论文
心肌缺血期短暂肢体缺血处理对大鼠心肌保护作用的研究
姓名:刘勇
申请学位级别:博士
专业:心血管外科
指导教师:孙宗全
2010-05
华中科技大学博士学位论文
心肌缺血期短暂肢体缺血处理对大鼠心肌保护作用的研究
华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管外科
博士生姓名:刘勇
导师姓名:孙宗全教授
中文摘要
目的:研究心肌缺血期短暂肢体缺血处理(remote perconditioning,RP)对大鼠心
肌缺血再灌注(I/R)损伤的保护作用。
方法:健康雄性 Wistar 大鼠经胸骨下段切口暴露心脏,打活结的方式结扎或旷置
冠状动脉左前降支(LAD)后,经心尖置测压管于左心室,建立在体心肌 I/R 损伤模型,
随机分为 7 组。(1)假手术组(Sham 组,n=8):经冠状动脉左前降支(LAD)下穿线后,
旷置;(2)缺血/再灌注组(IR 组,n=12):心脏 LAD 实施 30min 缺血/l80min 再灌注处
理;(3)心肌缺血期短暂肢体缺血处理组(RP 组,n=10):心脏 LAD 实施 30min 缺血
/l80min 再灌注处理;在实施心肌缺血期间对双下肢实施 3 次 5min 缺血/5min 再灌注;
(4)短暂肢体缺血预处理组(RIPC 组,n=11):心肌缺血前先对双下肢实施 3 次 5min 缺
血/5min 再灌注,而后对心脏 LAD 实施 30min 缺血/l80min 再灌注处理;(5)短暂肢体
缺血后处理组(RI-PostC 组,n=11):对心脏 LAD 实施 30min 缺血/l80min 再灌注处理;
再灌注开始的同时对双下肢实施 3 次 5min 缺血/5min 再灌注;(6)格列苯脲组(GL 组,
n=11):心脏 LAD 实施 30min 缺血/l80min 再灌注处理;在实施心肌缺血期间对双下
肢实施 3 次 5min 缺血/5min 再灌注;同时腹腔注射线粒体 ATP 敏感性钾通道(mKATP)
抑制剂格列苯脲 5mg/kg;(7)环孢霉素 A 组(CS 组,n=10):心脏 LAD 实施 30min 缺
血/l80min 再灌注处理;心肌缺血期间经心脏测压管注射线粒体通透性转换孔(mPTP)
抑制剂环孢霉素 A(CsA)10mg/kg。
从再灌注性心律失常(reperfusion arrhythmia,RA)、心肌舒缩能力、心肌损伤标
志物、心梗范围、心肌细胞凋亡相关蛋白的表达等方面评价 RP 对心肌 IRI 的保护作
用。计算缺血期心律失常(ischemia arrhythmia,IA)及 RA 评分、左心室发展压(LVDP)、
左心室压上升/下降最大速率(±dp/dtmax)及其恢复率;ABC 夹心 ELISA 法检测血清
肌酸激酶(CK)活性和心肌肌钙蛋白 T(c-TNT)、HE 染色观察心肌形态学改变,TTC
1
华中科技大学博士学位论文
染色法测定心肌梗死面积,免疫组化法检测心肌细胞凋亡相关蛋白 Bcl-2、Bax 的表
达,免疫印迹法(western blot)检测心肌凋亡蛋白 caspase-3 的表达。
结果:
IR组与 Sham 组比较,心肌缺血期 ST 段显著抬高(P<),
缺血期及再灌注期心律失常评分显著增加(P<),左心室收缩峰压(LVSP max),
±dp/dtmax 在再灌注起点时下降,差异均具有统计学意义(P<),c-TNT 显著升高
(P<)。
2. RP 对大鼠心肌 I/R 损伤所致 RA、心脏舒缩功能及心梗范围的影响再灌注早
期 RP 组 RA 评分为(±),与 IR 组(±)差异有统计学意义
(P=<);RP 组的 LVSP max、±dp/dtmax 均介于 Sham 组与 IR 组之间,但与 IR
组的差异无统计学意义。三组间 CK 差异无统计学意义,关于 c-TNT,IR 组与 Sham
组的差异具统计学意义(P=),但 RP 组与 IR 组、sham 组间差异均无统计学意
义。三组关于左室心肌危险区域(缺血范围)无显著差异,RP 组心梗范围显著小于
IR 组(P<0. 01)。
对大鼠心肌 I/R 损伤所致细胞凋亡的影响比较 IR 组与 RP 组的 Bcl-2、Bax
的表达结果发现,与 IR 组相比,RP 组 Bax 蛋白表达阳性心肌细胞百分比明显降低
(P<),而 Bcl-2 蛋白表达阳性百分比无显著性差异(P>),Bc