文档介绍：1
蛋白质对象的选择和样品的获取
2
一、研究对象的选择
无论何种来源的生物材料一般都含有成千上万种不同的蛋白质分子；
在一种生物组织中，同时又存在着多种蛋白质组分。虽然它们都具有肽链结构，但在分子大小、极性以
及电荷上会有所差异。
3
选择研究蛋白的原则：
在组织中含量比较高
相对比较稳定的蛋白质（如血液中的Hb；肌肉中的
肌球蛋白和肌动蛋白等）
从模式生物基因组测序结果来看，每一种生物有机体
内都还有大量的蛋白质（50％左右）从来没有被研究
过。
4
获取蛋白样品的方法：
直接从生物组织中提纯蛋白—为主
根据基因组测序获得的信息
5
应用各种分辨效果好的化学及物理化学方法
6
直接从生物组织中提纯蛋白——
蛋白质的分离纯化包括以下过程：
，并用适当的缓冲液将蛋白质抽提出来；
; （盐析法或有机溶剂法）
；
；
。
7
根据基因组测序获得的信息
（1）可以获得所要研究的特定蛋白质的AA序列。
先根据推出的AA序列合成对象蛋白中的一段肽，用它去获得有关的抗体，然后用抗体去探测蛋白质的存在，甚至可以用抗体通过亲和层析纯化对象蛋白
8
（2）去获得有关基因的cDNA全序列，然后通过重组DNA技术去表达重组蛋白。
有偏差，甚至完全是假象。
即使推测得到的蛋白质编码信息是对的，在细胞内还存在转录后的RNA加工，翻译后的蛋白质的修饰和加工等基因序列上目前还无法反映的信息。
9
制备过程中注意事项：
要求自始至终保持在天然状态
避免一切过激因素--如过酸或过碱，高温，
重金属等的影响。
2. 通常都在低温条件下操作。
3. 尽可能使样品中蛋白质的浓度维持在较高
水平。
10
二、细胞的破碎

少数蛋白质---存在于细胞外面（如血液和体液中）
大多数蛋白质---都存在于细胞的里面。
一般固形生物材料首先都必须加以破碎，以释放出细胞内的蛋白质组分。
生物材料必须新鲜
要求：
1. 材料 -80℃
2. 或者制成干粉（丙酮）
3. 低温存放