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血浆蛋白质醋纤膜电泳.pptx

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血浆蛋白质醋纤膜电泳.pptx

上传人:wz_198613 2021/2/28 文件大小:537 KB

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血浆蛋白质醋纤膜电泳.pptx

文档介绍

文档介绍:实验目的
1、掌握醋酸纤维素薄膜电泳的原理
2、掌握醋酸纤维素薄膜电泳分离血浆蛋白质
的实验操作技术和注意事项。
3、了解醋酸纤维素薄膜作支持物进行电泳
的优点及使用范围。
醋酸纤维素薄膜电泳
采用醋酸纤维素薄膜作为支持物的电泳方法叫做醋酸纤维素薄膜电泳。
醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯,将它溶于有机溶剂(如*** 、***仿、***乙烯、乙酸乙酯等)后,涂抹成均匀的薄膜,干燥后就成为醋酸纤维素薄膜。该膜具有均一的泡沫状结构,厚度约为120μm,通透性好,对分子移动阻力少,是一种良好的电泳支持物。
醋酸纤维素薄膜电泳的优点及应用
具有微量、快速、简便、区带清晰、灵敏度高、便于摄影和保存等优点。
用于科学实验、生化产品分析和临床化验,如血浆蛋白、血红蛋白、球蛋白、脂蛋白、糖蛋白、甲胎蛋白、同工酶等的分离鉴定。
原 理
血浆中各种蛋白质的等电点不同,。,在电场中向正极移动。由于血浆中各种蛋白质分子大小、形状及所带的电荷量不同,因而在醋酸纤维素薄膜上电泳的速度也不同。因此可以将它们分离为清蛋白(Albumin)、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白,纤维蛋白原6条区带。
血浆蛋白质的等电点、 平均相对分子量、及正常含量
球 蛋 白
清蛋白
A
α1 α2 β γ
pI
相对分子量
(×104)
含量(%)


57~72

20
2~5

30
4~9

9~15
~12
~
~30
12~20
实验材料
健康人血浆或动物血浆
试剂
1、
2、氨基黑10B染色液
3、漂洗液
4、洗脱液
5、透明液
(试剂配制参见实验讲义)
定量时用
仪器和器材
1、常压电泳仪、电泳槽
2、醋酸纤维素薄膜(2×8cm)
3、点样器(载玻片或盖玻片)、玻璃板
4、培养皿(泡膜、染色和漂洗用)
5、滤纸
6、镊子
7、试管、试管架、吸量管
8、分光光度计
(定量用)
操作步骤
1、薄膜准备
①将醋酸纤维素薄膜切成2×8cm的小条。
②。
③在薄膜角上用铅笔作一标记。
④将醋酸纤维素薄膜浸泡于缓冲液中20min。
操作步骤
醋酸纤维素薄膜规格及点样位置
8cm
2cm
点样线
点样区

(粗面)