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酶联免疫技术.pptx

上传人:wo1230 2021/2/28 文件大小:707 KB

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文档介绍

文档介绍:常用的检测方法 ------微生物法
1、仅适于抗生素总残留的检测,目前在牛
奶的抗生素检测中占据一定市场.
2、优点:为成本较低、检测速度较快;
3、缺点:不能区分具体的抗生素药物,灵
敏度和特异性相对较低.
常用的检测方法 ----物理化学法
1、如液相色谱(HPLC) 、气相色谱(GLC) 、质谱
(MS) 、薄层色谱法(TLC) 等,可用于鉴定和
定量。
2、优点:分离度好、专属性强,常常可以同时测
定几种药物。
3、缺点:需要专门仪器和熟练技术的分析人员,而且需要复杂的样品前处理和高纯度的化学试剂。由于样本前处理设备多、测定操作烦琐和费用高,在基层实验室推广和使用受到限制。因而检测大批样本较为困难。
常用的检测方法 -----生物芯片法
1、生物芯片(biochip)是指采用光导原位合成或微量点样等方法,将大量抗原等有序地固化于支持物(如玻片、硅片、聚丙烯酰***凝胶、尼龙膜等载体)的表面,组成密集二维分子排列,然后与已标记的待测生物样品中靶分子杂交,通过特定的仪器,比如激光共聚焦扫描或电荷偶联摄影像机(CCD)对杂交信号的强度进行快速、并行、高效地检测分析,从而判断样品中靶分子的数量.
2、主要特点是高通量、微型化和自动化 ,因涉及技术和仪器问题,目前还不能普及应用.
常用的检测方法 -----酶联免疫测定法
1、将抗原与抗体反应和酶化学反应结合到一起的
测定技术,近年来已研发出多种ELISA检测试
剂盒用于检测动物组织中的药物残留。
2、具有灵敏度高、快速、特异性强的特点,所需
仪器化程度低和样本前处理相对简单,特别适
于现场监控和大量样本筛查。
3、现用于兽药残留检测的试剂盒,如国外德国
R-Biopharm,国内深圳绿诗源、北京望尔等。
1. ELISA的原理
2. ELISA的类型
3. 试剂准备:免疫吸附剂
结合物
酶底物的准备
4. 对照设定
5. 标本的采取和保存
6. 结果判断
ELISA是一种免疫测定(immunoassay,IA)。基础:抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记,加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,由此进行定性或定量分析。
---利用抗原抗体的特异性反应作为识别手段,用酶催化底
物等方法作为显示系统,用微孔板等材料作为载体和分
离系统的一种生物学检测方法。
---结合物与相应的抗原(抗体)反应后,结合的酶仍能催
化底物生成有色物质,而颜色的深浅可定量待测物的含
量。
1. ELISA的原理
酶免疫测定类型
这种固相酶免疫测定方法在1971年最初建立时称为酶联免疫吸附剂测定(Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay),简称ELISA。
酶免疫技术
酶免疫组化
酶免疫测定
均相酶免疫测定
非均相酶免疫测定
固相酶免疫测定
液相酶免疫测定
 抗原抗体反应
 可逆性
抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态平衡,其反应式为:
Ag+Ab→Ag·Ab
抗体的亲和力(affinity),可以用平衡常数K表示:K=[Ag·Ab]/[Ag][Ab] ,Ag·Ab的解离程度与K值有关。高亲和力抗体的抗原结合点与抗原的决定簇在空间构型上非常适合,两者结合牢固,不易解离。解离后的抗原或抗体均能保持原有的结构和活性。
 特异性
抗原抗体的结合发生在抗原的决定簇与抗体的结合位点之间。化学结构和空间构型互补关系,具有高度的特异性。

测定某一特定的物质,而不需先分离待检物。
 最适比例