文档介绍：围术期脑缺血再灌注损伤一直是临床麻醉与复苏所关注的问题。对脑脑保护程度并不与它们所引起的脑代谢降低幅度成比例。目前,虽然多数再灌注损伤保护作用的机制,为其在实验及临床上的合理应用提供理论基础。本研究分为四部分:一、异丙酚对大鼠脑缺血再灌注损伤后海马线粒体能量代谢、酶活性及自由基系统的影响;二、异丙酚对大鼠脑缺血再灌大鼠脑缺血再灌注损伤后海马组织猣和虮泶锏挠跋欤凰摹脑缺血再灌注损伤是由多种因素共同作用而引起的一系列复杂的病理生理变化过程,其病理生理机制是一种损伤性级联反应,可引起一系列神经化学,蛋白质与核酸代谢的改变。近年来,随着神经科学和分子生物学技术的不断发展,已深入到亚细胞和分子水平来进一步揭示脑缺血再灌注损伤缺血再灌注损伤的机制以及麻醉药对其影响的研究仍是目前研究的热点课题之一,对其进行深入细致的研究有助于开发新的药物及脑保护方法,为对围术期脑缺血缺氧性损伤的保护开辟新的途径。许多研究表明异丙酚对中枢神经系统具有与巴比妥类药物相似的作用,可引起脑血管收缩、脑血流量减少、颅内压和脑氧代谢率降低。但近年来研究发现各种麻醉药所产生的研究认为异丙酚对脑缺血缺氧性损伤具有一定保护作用,但对其保护作用的机制迄今尚未完全阐明。因此有必要对其神经保护作用的机制进行更加深入的研究与探讨。本课题是结合国内外最新研究成果,在前人的基础上对异丙酚脑保护作用的机制进行更加深入细致的研究与探索。在大鼠全脑缺血再灌注损伤模型上,利用先进的观测指标及检测手段,进一步探讨异丙酚对大鼠脑缺血注损伤后海马组织氨基酸递质水平变化及神经元凋亡的影响;三、异丙酚对异丙酚对大鼠脑缺血再灌注损伤后海马组织一蚇狵虮前言的发病机制。实验材料与方法一、实验方法中文摘要达的影响。
锬P偷慕⒉捎肞冉樯艿姆椒ú⒆饕欢ǜ慕⒋毂佣源笫竽匀毖T俟嘧⑺鹕撕蠛B硐吡L迥芰看弧酶鼠全脑缺血再灌注损伤模型。动物腹腔注射戊巴比妥钠醉后,颈后正中切开分离肌肉,暴露第一颈椎翼孔,用直径的大头针烧灼双侧翼孔内椎动脉,造成永久性关闭。然后翻转大鼠作颈部正中切开,合颈部伤口,放回保温鼠笼。手术后骨蛔⑸渖硌嗡蛞毂印9定动物,螅战羲肯咦瓒暇弊芏鲅A鳎斐纱笫笕匀毖!H血螅煽K肯呋指茨匝A髟俟嘧ⅰJ笛楣逃萌让粑露燃铺酵妨续测定肛温,采用电灯泡和电热毯加热的方法,保持大鼠直肠温度在℃笛槎锓肿槿宥锸跚敖,自由饮水。将恍坌椋杭偈质醵哉兆椋龇掷胱刀龊途弊芏觯恍凶璞眨鹾腹腔注射生理盐水直鹪谧⑸浜、三个时点处死大直鹪谠俟嘧、鍪钡愦λ来笫蟆槲H毖T俟嘧⒁毂釉ご碜椋匆毂佑昧坑址治H鲅亲椋注射,分别在再灌注、鍪钡愦λ来笫蟆鹤椋阂毂·~,总量用配至匀毖G腔注射,分别在再灌注、三个时点处死大鼠。椋阂毂·~,总量用配至匀毖G腹鄄熘副昙胺椒活性及自由基系统的影响:全脑缺血再灌注保髯槎贤反λ大鼠唬掷氤龊B碜橹旱@涠场①法测定海马组织线粒体、暮浚②检测海马组织线粒体籏籄酶、“一浮、分离出双侧颈总动脉,用丝线环套颈总动脉,由耳后皮肤引出固定,缝大鼠随机分为椋椋喝毖T俟嘧⒍哉兆椋匀毖,在缺血前腹腔注射椋阂毂·~,总量用配至匀毖G骨同椋鼠。±。.
及神经元凋亡的影响:在再灌注时,、及腺苷酸③透射电镜观察海马线粒体超微结构的改变。毂佣源笫竽匀毖T俟嘧⑺鹕撕蠛B碜橹被岬葜仕奖浠分离海马组织液氮冷冻,取脑中间块%中性甲醛固定。.①法检测海马组织谷氨酸⑻烀哦彼、话被②流式细胞仪觳夂B碜橹窬赴牡蛲鲋甘③染色光镜检测海马蛲錾窬5拿芏取①—际跫觳夂B碜橹疌—虷基因的表达水毂佣源笫竽匀毖T俟嘧⑺鹕撕蠛B碜橹疘与—①—际跫觳夂B碜橹疘和—基因的表②免疫组化方法检测—蚇狵白栽谀宰橹械谋泶铩①脑缺血再灌注损伤后大鼠海马组织、,组比较则差异显著.②脑缺血再灌注损伤后各组海马线粒体的籏籄酶及酸和甘氨酸降谋浠毂佣源笫竽匀毖T俟嘧⑺鹕撕蠛B碜橹痗—虷基因表达的影响:于再灌注时,各组断头处死大鼠唬掷牒B碜橹氮冷冻,脑中间块用%中性甲醛缓冲液固定。②免疫组化方法检测猣和鞍自谀宰橹谋泶铩基因表达的影响:予再灌注保髯槎贤反λ来笫只,分离海马组织毂佣源笫竽匀毖T俟嘧⑺。骸,组间比较无显著性差的活性和暮浚液氮冷冻,取脑中间块用%中性甲醛缓冲液固定。达水平;结平;果·
④,其中,③脑缺血再灌注损伤后各组海马线粒体的活性有不同程度的降低,;异丙酚各组与楸冉嫌胁煌潭鹊母纳疲籧:、榧浔冉纤溆胁钜斓伤。其中,以橄吡L逅鹕俗钗Q现兀硐治O吡L甯叨戎渍停手谐现许多空泡,嵴减少或断裂,内膜完