文档介绍：实验四血涂片的制备与染色
【目的】掌握血涂片的制备和染色方法( preparation and staining of thin blood films )。
【原理】将一小滴血液均匀涂在玻片上，呈单层紧密分布，制成薄血片。用含天青 B 和伊红的 Romannowsk y类染料进行染色。细胞中的碱性物质如 RBC中的血红蛋白及嗜酸性粒细胞胞质中的嗜酸性颗
粒等与酸性染料伊红结合染成红色；细胞中的酸性物质如淋巴细胞胞质及嗜碱性粒细胞质中的嗜碱性颗粒等与碱性染料亚甲蓝结合染成蓝色；中性粒细胞的中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染成淡紫红色。
【器材】
1．载玻片使用前，必须仔细清洗，并用乙醇或软布清洁。
2．推片选择边缘光滑的载玻片，在两角分别作斜线标记，然后用玻璃切割刀裁去两角，制成约 15mm 宽度的推片。
3．吸耳球。
4．显微镜。
5．酒精灯或 Bunsen 灯。
6．采血针。
7．注射器和针头。
【试剂】
1．瑞氏( Wright )染液
(1 )1液：包含瑞氏染料、纯甲醇(AR级以上)600ml、甘油15ml。将全部染料放入清洁干燥的乳钵中，先加少量甲醇慢慢地研磨(至少 30min),以使染料充分溶解，再加一些甲醇混匀，然后将溶解的
部分倒入洁净的棕色瓶内，乳钵内剩余的未溶解的染料，再加入少许甲醇细研，如此多次研磨，直至染料全部溶解，甲醇用完为止。再加 15ml 甘油密闭保存。
U液：磷酸盐缓冲液(〜 ),包含磷酸二氢钾 (KHPQ) 、磷酸氢二钠(NaHPO) 、蒸馏水加至1000ml。配好后用磷酸盐溶液校正 pH,塞紧瓶口贮存。如无缓冲液可用新鲜蒸馏水代替。
吉姆萨染液包含吉姆萨染料、甘油35ml、甲醇65ml。将吉姆萨染料、甘油和甲醇放入含玻璃珠的容器内，每天混匀 3 次，连续 4 天，最后过滤备用。
瑞 - 吉复合染液
I液：包含瑞氏染料1g、、甲醇500ml、中性甘油10ml。将瑞氏染料和吉姆萨
染料置洁净研钵中，加少量甲醇，研磨片刻，再吸出上液。如此连续几次，共用甲醇 500ml。收集于棕色
玻璃瓶中，每天早、晚各摇 3min，共5d，以后存放1周即能使用。
U液：即磷酸盐缓冲液(〜 ) o包含无水磷酸二氢钾、无水磷酸氢二钠，加少量蒸馏水溶解，用磷酸盐调整 pH,加水至1000mlo
【标本】EDTA抗凝静脉血或末梢血。
【操作】
.采血
(1 )静脉采血法：用EDTA- K2抗凝1〜2h内的标本，使用玻棒、毛细管、注射针头等在距载玻片一端 1cm处加1滴抗凝血，直径约 4mm
(2)皮肤采血法：选择第三、四手指，并先采红细胞、白细胞计数，再采血 1 滴置洁净玻片上用于血
涂片制备。
•制作涂片左手平执载玻片，或放在类似桌子等平坦地方，右手持推片从后方移动接近血滴，使血
液沿推片边缘展开，将推片与载玻片呈 30°〜45°角，用均匀速度向前将血液推成厚薄适宜的血涂片(图
1-12 )，血涂片应呈舌状，头、体、尾三部分，且清晰可见。所有血液必须在推片到达末端前用完。贫血病人推片速度要快。
图1-12 血涂片制