文档介绍：分子生物学大实验
实验目的
学会基因工程的一般操作技术,具体包括
DNA提取,
PCR扩增,
目的基因纯化和连接,
感受态菌的制备及转化,
转化克隆的筛选和鉴定
大实验技术路线
总DNA提取目的基因扩增
5‘
变性
加热
5‘
5‘
引物
退火
5‘
5‘
底物
聚合
5‘
加热
变性
5‘
目的基因
5‘
切胶回收
接
转
增
检
大实验技术路线
2周实验安排
时间
实验内容
~30
总DNA提取
~
PCR扩增制备目的基因
~
目的基因纯化及其与载体的连接
~
大肠杆菌感受态细胞的制备和转化
~
转化克隆的筛选和鉴定
实验材料
刺蛾蛹
属鳞翅目刺蛾科(Eucleidae) ,成虫中等大小,体短而粗壮,多毛,黄色、褐色或绿色,有红色或暗色的简单斑纹。
幼虫俗称杨辣子,蛞蝓形,具枝刺及毒毛。化蛹时作石灰质的茧,形如雀卵。幼虫食叶性,为害多种果树及林木等。如黄刺蛾、青刺蛾等。
黄刺蛾
本实验的目的基因
线粒体DNA的COⅠ、COⅡ及tRNA基因,约2300bp。
昆虫线粒体DNA(mitochondrial DNA, mt DNA) 为双链闭环分子,分子量在1×10-7道尔顿,— 。
其中含有编码2个核糖体RNA(12S rRNA, 16S rRNA)、22个tRNA、1个细胞色素b、3个细胞色素氧化酶(COⅠ、COⅡ、COⅢ) 、6个NADH 降解酶(ND1~6) 和2个ATP酶(6和8)的基因。
线粒体DNA 结构示意图