分子生物学大实验操作指南.doc

文档介绍：分子生物学大实验操作指南
单林娜王莲哲编
常用试剂的配制方法
(一)配方
1、1MTris-HCl, , 500ml
Tris + 400ml H2O + 约26 ml 浓HCl
2、 M Na2EDTA,, 200ml (EDTA难溶于水,应优先配制,并加入适量NaOH助溶)
EDTA + 180ml H2O + 约8 g NaOH片(若是EDTA二钠盐可减半)
3、10% 葡萄糖
10g 葡萄糖+ 90ml H2O
4、1M NaOH:4g NaOH+ 96 ml H2O
5、KAc (3M K. 5M Ac)
(×3)g KAc + 30ml H2O + [×2/] 冰醋酸+ H2O——定容至100ml
(溶液III: KAc ,HAC , 加水至50mL。乙酸;醋酸;冰醋酸【英文名称】acetic acid 【结构或分子式】 CH3COOH 【相对分子量或原子量】 【密度】 醋酸钾(医药级) C2H3KO2 . )
6、70% 乙醇
7、TE50ml :10 mmol/L Tris-HCl, ,1 mmol/L EDTA,
1MTris-HCl( )
M Na2EDTA( )
H2O
8、CTAB抽提液100ml:
2%CTAB(十六烷基三乙基溴化铵)
100mmol/L Tris-HCl, / 1MTris-HCl( ) 10ml
20 mmol/L EDTA, / M Na2EDTA( ) 4ml
NaCl ()
(二)操作步骤
1、刷洗试剂瓶等玻璃器皿
清水——去污粉——清水4遍——蒸馏水2遍
2、按配方配制试剂
计算用量写出配方——称量(学****掌握电子天平用法)——混溶
3、灭菌(复****巩固压力锅用法)
实验一总DNA提取(4学时)
(一)总DNA提取
:学会提取纯化DNA的试剂的配法,学会使用离心机、移液器,掌握总DNA 的提取和纯化技术。
:
在SDS或 CTAB物质存在时,经机械研磨,使细胞破裂并释放出内含物,提取DNA。
CTAB是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度的溶液中沉淀核酸和酸性多聚糖的特性,在这种条件下,蛋白质和中性多聚糖仍留在溶液里,在高离子强度的溶液里,CTAB与蛋白质和大多数酸性多聚糖以外的多聚糖形成复合物,只是不能沉淀核酸。因此,CTAB可以用于从大量产生粘多糖的有机体如植物以及某些革兰氏阴性菌()中制备纯化DNA 。
提取DNA所用的提取液、吸头、离心管等需要高压灭菌以灭活DNase。

试材:刺蛾蛹
仪器、用具:离心机、离心管、微量移液器、吸头、吸水纸、水浴锅、冰箱、研钵、液氮罐、电子天平、pH计、高压灭菌锅、一次性手套和口罩等。
:
需配置的药品和缓冲液:
提取DNA缓冲液(CTAB法): 2% CTAB(