基因工程的基本操作过程.pptx

文档介绍：基因工程基本操作的四个步骤
1、目的基因的获取
2、基因表达载体的构建
3、将目的基因导入受体细胞
4、目的基因的检测与鉴定
一、目的基因的获取
1、目的基因主要是指______________________
编码蛋白质的结构基因
请举出三个以上的例子
2、获取目的基因的常用方法有哪些?
（1）从基因文库中获取
（2）利用PCR技术扩增
（3）人工合成
请阅读P9第一和二两段
(一)从基因文库中获取目的基因
将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库
基因文库
基因组文库
部分基因文库
（如:cDNA文库）

基因组文库与部分基因文库的关系
三种目的基因提取的方法有何优缺点？
优点
缺点
直接分离法
反转录法
根据已知氨基酸化学合成DNA法
操作简便广泛使用
工作量大，盲目，分离出来的有时并非一个基因
专一性强
操作过程麻烦，mRNA很不稳定，要求的技术条件较高
专一性最强
仅限于合成核苷酸对较少的简单基因
① 概念：PCR全称为_______________，是一项
在生物____复制___________的核酸合成技术
③条件：_______________________、
_______________、___________ (做启动子)、 ：
②原理：__________
④方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循
环的次数）
⑤结果：
聚合酶链式反应
体外
特定DNA片段
DNA复制
已知基因的核苷酸序列
四种脱氧核苷酸
一对引物
DNA聚合酶
指数
2n
使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增
(二)利用PCR技术扩增目的基因
b、PCR（聚合酶链式反应）技术扩增
由穆里斯等人于1988年发明，并于1993年获得若贝尔化学奖。
PCR反应的过程：（变性、退火、延伸、多次重复）
变性
退火
延伸
结果：双链DNA分子数为2n
可获取大量目的基因
⑥过程：
a、DNA变性（90℃-96℃）：双链DNA模板
在热作用下，_____断裂，形成___________
b、退火（复性25℃-65℃）：系统温度降低，引 物与DNA模板结合，形成局部________。
c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，从
引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补
的________。
氢键
单链DNA
双链
DNA链
(二)利用PCR技术扩增目的基因