文档介绍：实训八病毒的鸡胚接种技术
目的要求掌握鸡胚培养病毒的接毒和收毒方法,明确鸡胚培养病毒的应用。
仪器及材料受精卵、恒温箱、照蛋器、接种箱、蛋架、一次性注射器(1~5ml)、中号镊子、眼科剪和镊子、毛细吸管、橡皮乳头、灭菌平皿、试管、吸管、酒精灯、试管架、胶布、蜡、锥子、锉、煮沸消毒器、消毒剂(5%碘酊棉、75%酒精棉、5%石炭酸或3%来苏儿)、新城疫Ⅰ系或Ⅳ系疫苗。
方法与步骤(实验视频六)
(一)鸡胚的选择和和孵化应选择健康无病鸡群或SPF鸡群的新鲜受精蛋。为便于照蛋观察,以来航鸡蛋或其他白壳蛋为好。用孵化箱孵化,要注意温度、湿度和翻蛋。孵化最低温度为36℃,℃,相对湿度为60%。每日最少翻蛋3次。
发育正常的鸡胚照蛋时可见清晰的血管及鸡胚的活动。不同的接种材料需不同的接种途径(见图2-4),不同的接种途径需选用不同日龄的鸡胚。卵黄囊接种,用6~8日龄鸡胚;绒毛尿囊膜接种,用9~13日龄的鸡胚;绒毛尿囊腔接种,用9~12日龄的鸡胚;血管注射,用12~13日龄的鸡胚;羊膜腔和脑内注射,用10日龄的鸡胚。
(二)接种前的准备
病毒材料的处理怀疑污染细菌的液体材料,加抗生素(青霉素1000IU和链霉素1000μg/ml)置室温1h或4℃冰箱12~24h,高速离心,取上清液,或经细菌滤器滤过除菌。如为患病动物组织,应剪碎、匀浆、离心后取上清液,必要时加抗生素处理或过滤除菌。若用新城疫Ⅰ系或Ⅳ系疫苗,则无菌操作用生理盐水将其稀释100倍。
照蛋以铅笔划出气室、胚胎位置及接种的位置,标明胚龄及日期气室朝上立于蛋架上。尿囊腔接种选9~12日龄的鸡胚,接种部位可选择在气室中心或远离胚胎侧气室边缘,避开大血管。
(三)鸡胚的接种(以新城疫病毒的绒毛尿囊腔接种为例) 在接种部位先后用5%碘酊棉及75%酒精棉消毒,然后用灭菌锥子打一小孔,一次性1ml注射器吸取新城疫病毒液垂直或稍斜插入气室,刺入尿囊,~。注射后,用熔化的蜡封孔,置温箱中直立孵化3~7d。孵化期间,每6h照蛋一次,观察胚胎存活情况。弃去接种后24h内死亡的鸡胚,24h以后死亡的鸡胚应置0~4℃冰箱中冷藏4h或过夜(气室朝上直