实训十七 免疫荧光技术.doc

文档介绍：实训十七免疫荧光技术
目的要求了解荧光抗体的染色及镜检方法,明确此试验的实际应用。
仪器及材料荧光显微镜、冰冻切片机、载玻片、染色缸、 PBS液、~(配制:,,蒸馏水100ml。混合后取该缓冲液1份加9份甘油即成)、丙酮、猪瘟荧光抗体、疑似猪瘟的新鲜病料(淋巴结、肾、扁桃体等)。
方法与步骤
(一)标本制备
,制成压印片或冰冻切片,吹干。
, ,轻轻漂洗3~4次,每次3~4min。取出吹干。如不能及时染色,可用塑料纸包好,放入低温冰箱中保存。
(二)直接染色法
,放湿盒内置37℃染色30min。
、封片取出标本片, ,轻轻漂洗3~4次,每次3~4min,~。染色后应尽快镜检。

将猪瘟阳性标本、阴性标本固定后,以猪瘟荧光抗体染色、封片后镜检。
自发荧光对照以PBS代替荧光抗体染色。
抑制试验对照标本上加未标记的猪瘟抗血清,37℃于湿盒中30min后,PBS漂洗,再加标记抗体,染色同上。
。先用低倍物镜选择适当的标本区,然后换高倍物镜观察。
,而阴性对照、猪瘟自发荧光对照和抑制试验对照组应无荧光。
标本判定标准:
++++ 黄绿色闪亮荧光+++ 黄绿色的亮荧光
++