文档介绍：实验2 生物微核对环境污染的指示暨细胞有丝分裂相观察
相关基础知识
环境的三致性,即指环境中物理或者化学污染物对生物的致畸、致癌、致突变性,是目前环境污染中最主要的问题。三致的根本在于致突变,致畸、致癌常常是致突变的结果。
微核是无着丝点的染色体断片,在有丝分裂后期由于不能向两极移动而游离于细胞质中,在间期细胞核形成时,即可在它附近看到若干个很小的圆形结构,直径大约是细胞直径的1/20-1/5,这就是微核(micronucleus)。
微核是常用的遗传毒理学指标之一,指示染色体或纺锤体的损伤。由于这种损伤会因细胞受到的外界诱变因子的作用而加剧,而微核产生的概率又可与诱变因子的剂量呈正比,因此可以用微核出现的频率来评价环境诱变因子对生物遗传物质的损伤程度。各种类型的骨髓细胞中均能见到微核,但某些只有少量胞浆的有核细胞,其核是分叶而有突起的,这类分叶及突起常常被误认为是微核,容易造成计算误差。哺乳动物的红细胞,在成熟过程中将细胞核排出,成为无核细胞,而微核却留在细胞质中不被排出。这样,只要红细胞生成过程中出现过染色体断片,就能在成熟的红细胞内看到微核,一目了然,即使没有多少遗传学知识的人,稍加训练也能从事这方面的计数工作。染色体断裂实际上就是染色体的缺失。如果进行染色体畸变分析,首先要做染色核型分析(包括正常和异常的)。染色体数目多,形状小,则适于做核型分析的中间分裂相不易得到,而且核型分析时需要较好的遗传学知识,还需要较丰富的经验。与之比较,微核试验法是一种不需特殊试剂及设备,且快速而简便的检测方法。
蚕豆(vicia faba)根尖微核试验在1986年已被中国环保局列为一种环境生物测试的规范方法,它作为一种环境变异的检测手段,在我国不少地区的环保部门和医疗卫生系统中都有广泛的应用。蚕豆根尖微核实验与染色体畸变试验同样具有准确、快速、操作简便、有明显剂量—效应关系、适合大批量样品检测等特点。美国国家环保局也肯定了蚕豆根尖微核试验在环境突变性检测中的作用,对许多环境致癌物都作了标准化的试验,建立了庞大的数据库,并建议在全世界范围内推广。
了解各种环境污染对生物遗传物质的改变,增强环境保护意识
掌握微核试验技术
实验材料和仪器
:蚕豆种子
实验器材
Motic光学显微镜
试管(10ml)×2
蚕豆发芽盒
其它:镊子、手术刀、载玻片、盖玻片、滤纸等。
试剂
环磷酰胺
卡诺氏固定液:将乙醇和冰醋酸以3:1(V/V)混和配制;
水解分离液:盐酸与95%酒精1:1混合;
改良苯酚品红染液母液: 70%乙醇中,以1:9的比例将其与5%苯酚溶液混和,即得到改良苯酚品红染液母液。
苯酚品红染液:将45ml母液,6ml冰醋酸,6ml 37%甲醛混合均匀。
改良苯酚品红染液:20ml苯酚品红染液加入180ml 45%,静置两周后使用。
实验方法与步骤
种子处理
将蚕豆种子洗涤干净,室温下用蒸馏水浸泡发芽24小时,然后移入铺有干净纱布的托盘内培养。当初生根长到2cm时,选取发育良好的,大小与根长近似的幼根。
将选好的蚕豆芽放入发芽盒中,使根尖完全浸入处理水样中,室温下培养48小时后,用