文档介绍：实验七酵母菌细胞大小的测定
一、实验目的
了解测量微生物大小的原理;
学****并掌握接目测微尺的校正方法及微生物大小的测定方法,增强微生物细胞大小的感性认识。
二、实验材料
菌种:啤酒酵母(haromyces cerevisiae)菌悬液,枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)染色标本片。
仪器或其他用具:显微镜,接目测微尺,镜台测微尺,载玻片,盖玻片
三、实验原理
微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征,也是分类鉴定的依据之一。微生物细胞个体较小,需要在显微镜下借助于特殊的测量工具—测微尺来测定其大小。测微尺包括镜台测微尺和接目测微尺。
镜台测微尺是一张中央部分刻有精确等分线的载玻片,专门用于校定接目镜测微尺每小格的相对长度。通常,刻度的总长是1mm,被等分为100格,(即10μm)。镜台测微尺不直接用来测量细胞的大小。
接目测微尺是一块可以放入接目镜的圆形小玻片,其中央有精确的等分刻度,有等分为50小格和100小格的两种。在测量时将接目测微尺放在目镜的隔板上,即可来测量经显微镜放大后的细胞物象。也有专用的目镜,里面已经安放好了接目测微尺。
由于接目测微尺所测量的是经显微镜放大后的细胞物象,因此,在不同的显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同,接目镜测微尺每一小格所代表的实际长度也不一样。所以,在用接目测微尺测量微生物大小之前,必须先用镜台测微尺校定接目镜测微尺,以确定该显微镜在特定放大倍数的目镜和物镜下,接目镜测微尺每一小格所代表的实际长度,然后根据微生物细胞相当于的接目镜测微尺格数,计算出微生物细胞的实际大小。
图7-1测微尺的安装
图7-2目镜测微尺图7-3用镜台测微尺校正接目测微尺
四、操作步骤
装接目测微尺:取下显微镜的目镜,换上专用目镜。如果没有专用的目镜,则取下显微镜的目镜,旋下透镜,将接目镜测微尺刻度朝下放在接目镜的隔板上,再旋上目镜透镜,将装有测微尺的目镜装回镜筒。
接目测微尺的标定:
放镜台测微尺:将镜台测微尺刻度面朝上固定在显微镜的载物台上,注意不可放反。
标定:将低倍镜转入光路,镜台测微尺有刻度的部分移至视野中央,调节焦距,当清晰地看到镜台测微尺的刻度后,转动目镜使接目测微尺与镜台测微尺的刻度相平行。利用移动钮移动镜台测微尺,使两尺在某一区域内两线完全重合,然后分别数出两重合线之间镜台测微尺和接目测微尺所占的格数。(使接目测微尺的一条刻度线与镜台测微尺的一条刻度线相重合,再寻另一重合线,分别数出其间镜台测微尺和接目测微尺所占的格数)
用同样的方法,分别在高倍镜和油镜下对接目测微尺进行标定。(观察时光线不宜过强,否则难以找到镜台测微尺的刻度,换高倍镜和油镜标定时,务必十分细心,防止接物镜压坏镜台测微尺和损坏镜头)
计算:已知镜台测微尺每格长10μm,根据下列公式即可分别计算出在不同放大倍数下,接目测微尺每格所代表的长度。
接目测微尺每格长度(μm)=10n/m
n:两重合线间镜台测微尺格数