文档介绍：实验七-1
细胞荧光染色观察与荧光显微镜的使用
(示范:细胞形态观察与暗视野显微镜的使用)
实验目的与教学要求
掌握荧光显微镜的成像基本原理及其使用;
掌握暗视野显微镜的成像基本原理及其使用。
荧光显微镜是一种较为常用的的光学显微镜,其基本原理是利用一定波长的激发光对样品进行激发,使之产生一定波长的荧光,从而用于对样品结构或其组分进行定性、定位、定量观察检测。
一、荧光显微镜的成像原理
什么是荧光?
物质中的电子吸收光的能量由低能状态转变为高能状态,再回到低能状态时释放出的光。
即:物质吸收短波光,发射出的长波光。
保持固有的荧光特性
荧光波长>激发波长
荧光强度极小于激发光的强度
有不同程度的衰减
荧光强度取决于激发光强度、被检物浓度、荧光效率
荧光的性质
优点:
检出能力高
对细胞的刺激小
能进行多重染色
用途:
物体构造的观察
荧光的有无、色调比较进行物质判别
发荧光量的测定对物质定性、定量分析
荧光显微镜的优点和用途
荧光素的特性
对细胞结构或组分的定性、定位、半定量研究。
作为生物大分子筛选与鉴定的标记物。
荧光显微镜技术在生命科学研究中的应用