文档介绍：愈伤组织培养
主要内容:
材料的制备
愈伤诱导与分化
形态发生
愈伤的培养
第一节植物材料(外植体)的制备
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诱导愈伤组织的成败关键主要不是实验材料,而是培养条件,其中激素的成分和浓度是最重要的因素。
双子叶植物为最多,单子叶植物(1990’s),此外,裸子植物、蕨类和藓类植物也有诱发成功的例子。
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微生物一旦与培养基接触,就迅速繁殖,抑制愈伤组织的生长。
用抗菌素来抑制微生物的生长,在短时间有效,而且抗菌素只能对一定谱系中的细菌才产生作用,该谱系以外的微生物仍然可以大量繁殖。
抗菌素还可能抑制植物组织的生长。
得到无菌材料,植物组织必须先进行消毒。
有好几种化学试剂都能起到表面消毒的作用,试剂的选择及处理时间的长短要根据材料对试剂的敏感性来决定。
一般都采用在消毒后能很容易去除的药剂。
因为消毒剂对植物细胞也有杀伤作用,若不去除就会妨碍愈伤组织的发生。
例如用无菌水反复冲洗后可以把大部分药剂都洗掉,或者能自动分解变成低毒性物质。
本氯酸钠能分解成为具有杀菌效能的氯气,然后就散失到空气中。
低浓度的氯化汞是一种令人满意的消毒剂,只是难以去除,故在消毒后必须用大量清水冲洗材料。
在材料放入消毒剂之前,先在乙醇中漂洗一下,可以使材料表面弄湿,从而使消毒剂易于渗入并杀死微生物。

消毒后的植物材料,即可进行培养。
从外表均一的外植体长出的愈伤组织,在开始阶段是相当一致的,而从茎、根等器官切段上长出的则是一个混杂的愈伤组织。
有些外植体外表上看来是由同一类细胞组成,例如烟草的髓、胡萝卜的次生韧皮部、菊芋的块茎等,这些细胞中DNA的含量有很大差别。这种差别可能是由于细胞核中染色体数目的差别,即倍性不同所造成的。
接种的外植体的大小和形状并不需要严格限制
不能太小,小于肉眼能见的限度时,细胞分裂可能难以发生。故一般要求切块的大小要适当。
外植体的细胞数目多,获得愈伤组织的机会也多。
如果目的仅在于得到愈伤组织,那末将茎的切段、叶、根、花、果实或种子,或其中的某种组织切成一片片或一块块放到培养基上就可以了。
如果要定量地研究愈伤组织的发生,那末外植体的大小必须一致,形状和组成也要基本相同。进行这类研究常选用组织块较大的材料,例如胡萝卜的贮藏根、马铃薯的块茎、菊芋、荷兰防风草等。这样才能得到足够数量的、无菌的、一致的、适合于培养的外植体。