文档介绍：核磁共振原理及其在生物学中的应用
第七章仪器和实验方法
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核磁共振基本原理 8讲
吴季辉
样品的准备
样品的体积
现代超导谱仪一般使用5mm直径样品管,-,。早期作13C-NMR谱使用10mm直径样品管,-2ml。
核磁共振基本原理 8讲
吴季辉
在样品管中溶液的深度由两个因子决定,样品若超过一定高度,超过部分将会接收不到发射线圈发射的射频造成浪费;若太低则样品与空气磁化率的不同造成界面磁化率突变会影响样品中磁场的均匀性
样品的浓度
由于核磁共振实验固有的低灵敏度,所以它需要比一般红外、紫外实验更大的样品量,这往往成为核磁共振技术在生物学中应用的一个关键问题
对于质子磁共振波谱,样品浓度一般在10-2-10-4 M。在FT谱仪中通过多次波谱累加可以降低对最低浓度的要求,只要时间足够,在原则上对于一个分子量20000的蛋白质,可以得到1-3mg样品的1H核磁共振波谱
核磁共振基本原理 8讲
吴季辉
样品的浓度
对于13C谱来说,由于13C的低灵敏度,样品浓度的最低限度是10-2M。对于一个分子量为20000的蛋白质,使用10mm直径的样品管,,则需要大约300mg的样品
天然小蛋白质5mM
同位素标记的蛋白质 >1mM
溶剂的选择
一个理想的溶剂必须满足以下的条件:
1. 样品在其中有高溶解度;
2. 在我们所感兴趣的波谱范围内没有溶剂峰;
3. 在做变温实验的温度范围内保持液体状态
通常使用一些氘代溶剂
减少溶剂峰的干扰
核磁共振基本原理 8讲
吴季辉