文档介绍：真核表达体系
转染方法
磷酸钙沉淀
DEAE葡聚糖介导转染
电穿孔
脂质体转染;人造膜
显微注射
筛选标志 tk- Neor G418
瞬时转染目的基因不整合进宿主基因组
稳定转染目的基因整合进宿主基因组
tk- 细胞突变株筛选转染细胞
胸苷激酶(tk)
TTP:从头合成(氨甲喋呤阻断),补救合成
HAT选择(H:次黄嘌呤;A:氨甲喋呤;T:胸苷)
tk+:生长
tk-+带tk基因的质粒:生长
药物筛选转染细胞
neor
新霉素:细菌抗生素,干扰原核生物蛋白质合成
G418:干扰原核、真核生物
neo:磷酸转移酶,使G418失活
neo 与目的基因连锁,转染
目的基因的定点诱变及其应用
基因定点诱变技术
基因定点诱变技术的应用
长效胰岛素、快速吸收胰岛素
基因克隆的改建
碱性成纤维细胞生长因子(bFGH):牛源性→人源性,2个核苷酸的差异
第九章 DNA序列测定
末端终止法--待测单链DNA 模板引物四种dNTP(其中一种用32P/35S标记) 终止剂(ddNTP) DNA聚合酶
Sanger发明:两次获得诺贝尔奖
分别得到ddA ddT ddG ddC结尾的片段