文档介绍：生物化学大实验

(适用于生物技术、生物工程等相关专业)

(王吉中,冯昕编写)

食品与生物工程学院

2004年5月8日

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目录

实验一血清免疫球蛋白的提取分离、纯化及鉴定. . . . . . . . . . . . . . . . .1
I 血液及组织样品的制备. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
II 蛋白质的沉淀反应. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .4
III 总氮量的测定一微量凯氏定氮法. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .6
IV 透析. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9
V 蛋白质含量测定. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10
VI 凝胶层析法分离纯化蛋白质. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .15
VII SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的相对分子质量. . . . . . . . . . . . . .17
实验二血清白蛋白的分离与纯化. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .21
实验三种子蛋白质系统分析. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .24
I 种子蛋白质含量测定(凯氏定氮法). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .24
(氮基酸自动分析仪法). . . . . . . . . . . . . . . . .26
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. .28
(SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法). . . . . . . . . . . . . . . . . . .30
实验四果实菠萝蛋白酶的动力学测定. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .33
实验五苯丙氨酸解氨酶的纯化及活性测定. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .38

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实验一血清免疫球蛋白的提取分离、纯化及鉴定

I 血液及组织样品的制备

分析组织中某种物质的含量、探索物质代谢的过程和规律,经常使用动物的肝、肾、
脑、粘膜和肌肉等组织,也选用全血、血浆、血清或者无蛋白血滤液等血液样品,有时
也采用尿液、胃液等完成各种生化实验。掌握以上各种实验样品的正确处理和制备方法
是保证生化实验顺利进行的关键。
一、血液样品
(一)采血
测定用的血液,多由静脉采集。一般在饲喂前空腹采取,因此时血液中化学成分含
量比较稳定,采血时所用的针头、注射器,盛血容器要清洁干净;接血时应让血液沿着
容器壁慢慢注入,以防溶血和产生泡沫。
(二)血清、全血及血浆的制备

血清是全血不加抗凝剂自然凝固后析出的淡黄清亮液体。制备方法是:将刚采集的
血液直接注入试管或离心管中。将试管放成斜面,让其自然凝固,一般经 3h 血块自然收
缩而析出血清;也可将血样放入 37 ℃恒温箱内,促使血块收缩,能较快约析出血清。
为了缩短时间,也可用离心机分离(未凝或凝固的均可离心),分离出的血青,用吸管
吸出置于另一试管中,若不清亮或带有血细胞,应重离心,加盖冷藏备用。

取清洁干燥的试管或其它容器,收集动物的新鲜血液,立即与适量的抗凝剂充分混
合,所得到的抗凝血为全血。每毫升血液中加入抗凝剂的种类可以根据实验的需要进行
选择,但是用量不宜过大,否则将影响实验的结果。将已抗凝的全二于 2,000r / min 离
心 10min ,沉降血